| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 引言#ⅹ | 第13-16页 |
| 上篇 | 第16-49页 |
| 第一章 稻瘟病菌及其致病性 | 第16-24页 |
| 1 稻瘟病菌与稻瘟病 | 第16-17页 |
| 2 稻瘟病菌生长主要时期及其致病特性 | 第17-24页 |
| ·分生孢子的吸附、萌发与侵染前期 | 第17-18页 |
| ·附着胞的形成与侵入 | 第18-22页 |
| ·稻瘟病菌在寄主中的定殖 | 第22-24页 |
| 第二章 稻瘟病菌等致病真菌致病过程的信号识别与信号传导 | 第24-33页 |
| 1 诱导真菌芽管生长和附着胞形成的环境因子 | 第24-25页 |
| ·化学信号因子 | 第24页 |
| ·物理信号因子 | 第24-25页 |
| 2 真菌对外界信号的识别 | 第25-28页 |
| ·感受物理因子的受体 | 第25页 |
| ·感受化学因子的受体 | 第25-26页 |
| ·细胞骨架参与 | 第26页 |
| ·多种信号感受机制并存 | 第26-28页 |
| 3 参与稻瘟病菌芽管生长和附着胞形成的信号传导途径 | 第28-33页 |
| ·G蛋白 | 第28-29页 |
| ·cAMP信号途径 | 第29-30页 |
| ·MAPK途径 | 第30-32页 |
| ·PMK1 | 第31页 |
| ·MPS1 | 第31页 |
| ·OSM1 | 第31-32页 |
| ·信号途径的交叉对话(crosstalk) | 第32-33页 |
| 第三章 Ca~(2+)信号途径与真菌致病性 | 第33-38页 |
| 1 钙信号途径 | 第33-35页 |
| 2 真菌钙信号途径的研究进展 | 第35-38页 |
| ·酿酒酵母的钙信号途径 | 第35-36页 |
| ·钙信号途径与致病真菌致病性 | 第36-38页 |
| ·钙信号途径与稻瘟病菌 | 第38页 |
| 主要参考文献 | 第38-49页 |
| 下篇 | 第49-125页 |
| 第一章 Ca~(2+)信号途径抑制剂对稻瘟病菌分生孢子萌发及附着胞形成的影响 | 第49-60页 |
| 1 材料与方法 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·供试菌株 | 第51页 |
| ·供试药剂 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-52页 |
| ·分生孢子的获得 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51页 |
| ·检测方法 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-58页 |
| ·EGTA对M.grisea分生孢子萌发及附着胞形成的抑制作用 | 第52-53页 |
| ·Verapamil对M.grisea孢子萌发及附着胞形成的抑制作用 | 第53-54页 |
| ·U-73122对M.grisea孢子萌发及附着胞形成的抑制作用 | 第54-56页 |
| ·KN-93对M.grisea孢子萌发及附着胞形成的抑制作用 | 第56-57页 |
| ·四种抑制剂对孢子形态和附着胞形成的影响 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第二章 稻瘟病菌钙调素基因的克隆、拷贝数及表达规律研究 | 第60-77页 |
| 1 材料与方法 | 第61-67页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·供试菌株 | 第61页 |
| ·供试药剂 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-67页 |
| ·RNA提取方法(Trizol法) | 第61-62页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第62页 |
| ·热激转化及转化子的蓝白斑法筛选 | 第62-63页 |
| ·质粒提取方法(碱裂解法) | 第63页 |
| ·稻瘟病菌菌丝DNA提取方法(CTAB法) | 第63页 |
| ·稻瘟病菌钙调素基因克隆方法 | 第63-64页 |
| ·Southern杂交 | 第64-66页 |
| ·分生孢子的获得 | 第66页 |
| ·芽管及附着胞产生方法 | 第66-67页 |
| ·半定量RT-PCR分析方法 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-74页 |
| ·稻瘟病菌cam基因的克隆 | 第67-68页 |
| ·稻瘟病菌cam基因的序列特征 | 第68-72页 |
| ·稻瘟病菌cam基因的拷贝数验证 | 第72-73页 |
| ·cam基因Southern杂交探针的制备、标记及标记效率检测 | 第72页 |
| ·Southern杂交检测cam基因的拷贝数 | 第72-73页 |
| ·半定量RT-PCR分析稻瘟病菌cam基因的表达规律 | 第73-74页 |
| ·内标的选定 | 第73页 |
| ·半定量分析结果 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-77页 |
| 第三章 钙调素的免疫胶体金定位研究 | 第77-88页 |
| 1 材料与方法 | 第78-80页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·方法 | 第79-80页 |
| ·样品的固定包埋 | 第79页 |
| ·胶体金标记方法 | 第79-80页 |
| ·胶体金颗粒统计分析 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-85页 |
| ·CAM在稻瘟病菌主要生长时期分布定位 | 第80-81页 |
| ·CAM在大豆疫霉主要生长时期的分布定位 | 第81-85页 |
| 3 讨论 | 第85-88页 |
| 第四章 稻瘟病菌钙调素基因敲除载体、反义表达载体、正义表达载体的构建与验证 | 第88-106页 |
| 1 材料和方法 | 第89-93页 |
| ·材料 | 第89页 |
| ·试剂 | 第89页 |
| ·质粒 | 第89页 |
| ·方法 | 第89-93页 |
| ·质粒的提取 | 第89页 |
| ·质粒的酶切 | 第89-91页 |
| ·酶切产物的回收 | 第91页 |
| ·连接 | 第91-92页 |
| ·电转化方法 | 第92-93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-104页 |
| ·cam基因敲除载体的构建 | 第93-97页 |
| ·cam同源重组替换载体的构建策略 | 第93页 |
| ·cam基因同源片段的获得 | 第93-95页 |
| ·cam基因敲除载体第一步重组 | 第95-96页 |
| ·cam基因敲除载体第二步重组 | 第96-97页 |
| ·诱导表达载体的构建 | 第97-104页 |
| ·诱导表达载体的构建策略 | 第97-99页 |
| ·pSO1质粒的酶切鉴定 | 第99-100页 |
| ·cam正义、反义诱导表达载体的构建 | 第100-102页 |
| ·bfp表达载体的构建 | 第102-104页 |
| ·新构建载体的保存 | 第104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 第五章 稻瘟病菌钙调素遗传转化子的筛选及性状分析 | 第106-125页 |
| 1 材料与方法 | 第108-111页 |
| ·材料 | 第108-109页 |
| ·方法 | 第109-111页 |
| ·原生质体的制备 | 第109页 |
| ·PEG介导的转化 | 第109-110页 |
| ·Southern分析方法 | 第110页 |
| ·致病性测定方法 | 第110页 |
| ·转化子生物学性状分析方法 | 第110-111页 |
| 2 结果与分析 | 第111-122页 |
| ·稻瘟病菌遗传转化系统的建立与验证 | 第111-114页 |
| ·原生质体的获得与再生验证 | 第111页 |
| ·bfp转化子对转化系统的的验证 | 第111-114页 |
| ·稻瘟病菌钙调素遗传转化子的筛选与验证 | 第114-116页 |
| ·稻瘟病菌钙调素基因敲除可能导致致死突变 | 第114页 |
| ·cam正义、反义转化子的筛选与验证 | 第114-116页 |
| ·cam正义、反义转化子的致病性分析 | 第116-117页 |
| ·cam正义、反义转化子的生物学性状分析 | 第117-122页 |
| ·cam正义、反义转化子菌落形态特征 | 第117页 |
| ·cam正义、反义转化子菌丝生长测定 | 第117-119页 |
| ·cam正义、反义转化子的孢子萌发率及附着胞形成率的测定 | 第119-122页 |
| 3 讨论 | 第122-125页 |
| 附录 大豆疫霉的ITS分子检测 | 第125-134页 |
| 1 材料和方法 | 第126页 |
| ·供试菌株 | 第126页 |
| ·大豆疫霉游动孢子、卵孢子的获得 | 第126页 |
| ·DNA的提取 | 第126页 |
| ·PCR扩增及产物检测 | 第126页 |
| 2 结果与分析 | 第126-131页 |
| ·特异引物的设计及PCR反应体系、扩增条件的建立 | 第126-127页 |
| ·特异引物设计 | 第126-127页 |
| ·PCR扩增条件的优化 | 第127页 |
| ·引物特异性的验证 | 第127-129页 |
| ·特异引物的检测应用 | 第129-131页 |
| ·直接用大豆疫霉游动孢子的检测 | 第129-130页 |
| ·游动孢子破碎及检测 | 第130-131页 |
| ·卵孢子的检测 | 第131页 |
| ·大豆疫霉发病组织的检测 | 第131页 |
| ·检测试剂盒的配制及稳定性验证 | 第131页 |
| 3 讨论 | 第131-134页 |
| 本论文中的英文缩写及译名 | 第134-135页 |
| 攻读博士学位期间已发表的论文 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
