中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
第一章 文献综述-植物生产疫苗和幽门螺旋杆菌疫苗研究进展 | 第11-28页 |
1 植物生产疫苗的研究进展 | 第11-19页 |
·植物生产疫苗的特点 | 第11-13页 |
·植物生产疫苗的产生原因 | 第13-14页 |
·生产疫苗的植物表达系统 | 第14-15页 |
·疫苗表达植物的选择 | 第15-17页 |
·植物疫苗的一些思考 | 第17-19页 |
2 幽门螺旋杆菌疫苗研究进展 | 第19-28页 |
·Hp疫苗保护性抗原 | 第19-26页 |
·全菌抗原 | 第20-21页 |
·尿素酶 | 第21-23页 |
·空泡毒素和毒素相关蛋白 | 第23-24页 |
·热休克蛋白 | 第24页 |
·其它 | 第24-26页 |
·粘膜免疫佐剂 | 第26页 |
·展望 | 第26-28页 |
第二章 UreB基因克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 | 第28-45页 |
1 材料和方法 | 第28-34页 |
·实验材料 | 第28-29页 |
·质粒与菌株 | 第28页 |
·酶及主要试剂 | 第28-29页 |
·实验方法 | 第29-34页 |
·Hp染色体DNA的提取 | 第29页 |
·PCR扩增UreB基因 | 第29-30页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
·DNA片段回收 | 第30-31页 |
·DNA酶切 | 第31页 |
·DNA连接 | 第31页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第31页 |
·DNA转化大肠杆菌 | 第31-32页 |
·质粒DNA的小量快速抽提 | 第32页 |
·质粒DNA的大量制备 | 第32-33页 |
·质粒DNA的纯化 | 第33-34页 |
·菌种保存 | 第34页 |
·DNA定量 | 第34页 |
·UreB克隆基因序列测定 | 第34页 |
·序列分析 | 第34页 |
2 结果和分析 | 第34-44页 |
·UreB基因克隆 | 第34-37页 |
·UreB基因序列测定 | 第37页 |
·与GenBank中公布的菌株UreB序列比较 | 第37-39页 |
·pBI-UreB表达载体的构建 | 第39-41页 |
·pCA-UreB表达载体的构建 | 第41-44页 |
3 讨论 | 第44-45页 |
第三章 农杆菌介导的烟草转化 | 第45-57页 |
1 材料和方法 | 第45-51页 |
·实验材料 | 第45页 |
·实验方法 | 第45-51页 |
·农杆菌的培养 | 第45页 |
·DNA直接导入农杆菌 | 第45-46页 |
·农杆菌介导的转化 | 第46-47页 |
·CTAB法大量提取植物基因组DNA | 第47页 |
·PCR检测转化植株 | 第47-48页 |
·PCR-Southern杂交检测转化植株 | 第48-49页 |
·Western-blot检测转转化植株 | 第49-51页 |
2 结果和分析 | 第51-54页 |
·烟草转化植株的获得 | 第51-52页 |
·烟草转化植株的PCR法鉴定 | 第52页 |
·烟草转化植株的PCR-Southern分析 | 第52-53页 |
·烟草转化植株的SDS-PAGE分析 | 第53-54页 |
·烟草转化植株的Western-blot分析 | 第54页 |
3 讨论 | 第54-57页 |
第四章 农杆菌介导的水稻和草莓转化 | 第57-70页 |
1 材料和方法 | 第57-61页 |
·实验材料 | 第57页 |
·实验方法 | 第57-61页 |
·水稻愈伤的获取 | 第57-58页 |
·农杆菌培养 | 第58页 |
·共培养和水稻抗性愈伤组织的选择 | 第58页 |
·GUS基因组织化学染色 | 第58-59页 |
·水稻抗性愈伤组织的诱导分化和生根 | 第59页 |
·水稻转化植株DNA提取 | 第59页 |
·PCR检测转基因植株 | 第59页 |
·PCR-Southern杂交检测水稻转化植株 | 第59页 |
·Western-blot检测水稻转化植株 | 第59页 |
·草莓外植株选择压力的确定 | 第59页 |
·叶盘法转化草莓 | 第59-61页 |
2 结果和分析 | 第61-67页 |
·水稻胚性愈伤组织诱导和培养 | 第61-62页 |
·水稻转化植株的获得 | 第62-63页 |
·水稻抗性愈伤组织GUS染色 | 第63页 |
·水稻转化植株的PCR检测 | 第63-64页 |
·水稻转化植株的PCR-Southern分析 | 第64-65页 |
·水稻转化植株的SDS-PAGE分析 | 第65页 |
·水稻转化植株的Western-blot分析 | 第65-66页 |
·草莓外植体选择压的确定 | 第66页 |
·草莓抗性愈伤组织的获得 | 第66-67页 |
·PCR检测草莓抗性愈伤组织 | 第67页 |
3 讨论 | 第67-70页 |
参考文献 | 第70-77页 |
致谢 | 第77页 |