| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 前言 | 第8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第8-23页 |
| 1 植物凝集素与抗虫基因工程 | 第8-15页 |
| 1．1 植物凝集素的定义 | 第9页 |
| 1．2 植物凝集素的种类 | 第9-10页 |
| 1．2．1 根据植物凝集素亚基的结构特征分类 | 第9页 |
| 1．2．2 根据植物凝集素的同源性及进化关系分类 | 第9-10页 |
| 1．3 植物凝集素的性质 | 第10-11页 |
| 1．4 植物凝集素的防御作用 | 第11-12页 |
| 1．5 植物凝集素的杀虫机理 | 第12页 |
| 1．6 植物凝集素基因在抗虫植物基因工程中的应用现状 | 第12-13页 |
| 1．7 植物凝集素基因在抗虫基因工程上的特点 | 第13页 |
| 1．8 雪花莲凝集素基因及其在抗虫基因工程中的地位 | 第13-15页 |
| 2 根癌农杆菌介导的遗传转化研究进展 | 第15-19页 |
| 2．1 农杆菌介导的转化机理 | 第15-16页 |
| 2．2 农杆菌介导转化的特点 | 第16页 |
| 2．3 影响农杆菌介导的植物基因转化的主要因素 | 第16-19页 |
| 2．3．1 不同属性农杆菌对转化的影响 | 第16-17页 |
| 2．3．2 植物基因型及外植体对转化的影响 | 第17-18页 |
| 2．3．3 培养方法对转化的影响 | 第18-19页 |
| 3 菊花的离体再生及遗传转化研究进展 | 第19-20页 |
| 3．1 转化再生体系的建立 | 第19页 |
| 3．2 菊花遗传转化研究进展 | 第19-20页 |
| 3．2．1 选择报告基因的转入 | 第19-20页 |
| 3．2．2 色素调节基因的转入 | 第20页 |
| 3．2．3 提高抗性的转基因 | 第20页 |
| 3．2．4 改变株形的转基因 | 第20页 |
| 3．2．5 外源基因的稳定性 | 第20页 |
| 4 实时荧光定量PCR技术的原理 | 第20-21页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二部分 根癌农杆菌介导的菊花遗传转化 | 第23-36页 |
| 1 材料 | 第23页 |
| 1．1 植物材料 | 第23页 |
| 1．2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-26页 |
| 2．1 菊花组织培养及离体叶片再生 | 第23-24页 |
| 2．1．1 植物培养基配制 | 第23页 |
| 2．1．2 菊花试管苗的快速繁殖 | 第23-24页 |
| 2．1．3 菊花叶片再生 | 第24页 |
| 2．2 菊花叶片基因转化 | 第24-26页 |
| 2．2．1 农杆菌的培养与保存 | 第24-25页 |
| 2．2．2 筛选培养基的配制 | 第25页 |
| 2．2．3 外源基因转化方法 | 第25-26页 |
| 2．3 转化效率评价指标 | 第26页 |
| 2．4 培养条件 | 第26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-35页 |
| 3．1 菊花试管苗的快繁 | 第26页 |
| 3．2 菊花叶片再生 | 第26-27页 |
| 3．3 Kan抗性芽的筛选及转化植株的获得 | 第27-28页 |
| 3．4 转化关键因子研究 | 第28-35页 |
| 3．4．1 菊花转化筛选压的确定 | 第28-30页 |
| 3．4．2 苗龄及外植体状态对转化的影响 | 第30-31页 |
| 3．4．3 预培养对转化的影响 | 第31页 |
| 3．4．4 农杆菌状态对转化的影响 | 第31-32页 |
| 3．4．5 菌液浓度对转化的影响 | 第32-33页 |
| 3．4．6 侵染时间对转化的影响 | 第33页 |
| 3．4．7 共培养条件对转化的影响 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 4．1 菊花叶片基因转化抗生素的选择及选择压的确定 | 第35页 |
| 4．2 转化条件优化策略的初步探讨 | 第35-36页 |
| 第三部分 雪花莲凝集素转基因植株的检测 | 第36-45页 |
| 1 材料 | 第36页 |
| 1．1 植物材料 | 第36页 |
| 1．2 酶及试剂 | 第36页 |
| 1．3 引物 | 第36页 |
| 1．4 仪器 | 第36页 |
| 1．5 桃蚜 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-40页 |
| 2．1 转基因植株的PCR检测 | 第36-39页 |
| 2．1．1 农杆菌双元载体中Mini-Ti质粒DNA的提取 | 第36-38页 |
| 2．1．2 CTAB法提取菊花叶片总DNA | 第38页 |
| 2．1．3 转基因植株中目的基因的PCR检测 | 第38-39页 |
| 2．1．4 外源基因中CaMV35S启动子的PCR检测 | 第39页 |
| 2．1．5 转基因植株的荧光定性PCR检测 | 第39页 |
| 2．2 转基因植株抗虫实验 | 第39-40页 |
| 2．2．1 桃蚜的饲养 | 第39页 |
| 2．2．2 转基因植株离体叶片抗虫实验 | 第39页 |
| 2．2．3 转基因植株幼苗抗虫实验 | 第39页 |
| 2．2．4 抗蚜效果评价指标 | 第39-40页 |
| 2．3 转基因植株的凝血活性分析 | 第40页 |
| 2．3．1 红细胞悬浮液制备 | 第40页 |
| 2．3．2 样品提取液的制备 | 第40页 |
| 2．3．3 凝血反应 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-43页 |
| 3．1． 转基因植株PCR检测 | 第40-42页 |
| 3．1．1 转基因植株中目的基因的PCR检测 | 第40-41页 |
| 3．1．2 转基因植株外源基因中CaMV35S启动子的PCR检测 | 第41页 |
| 3．1．3 转基因植株的实时荧光定量PCR检测 | 第41-42页 |
| 3．2 转基因植株抗蚜虫初步鉴定 | 第42-43页 |
| 3．2．1 转基因植株离体叶片抗蚜虫初步鉴定 | 第42页 |
| 3．2．2 转基因植株幼苗抗蚜虫初步鉴定 | 第42-43页 |
| 3．3 转基因植株的凝血活性分析 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 4．1 转基因植株抗蚜性的探讨 | 第43-44页 |
| 4．2 PCR反应结果的准确性探讨 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| ABSTRAC | 第46-47页 |
| 附录 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
