| 摘要（中文） | 第1-12页 |
| 摘要（英文） | 第12-14页 |
| 前言 | 第14页 |
| 1 水稻草状矮化病毒研究概况 | 第14-33页 |
| 1．1 病害的发生、分布 | 第14-15页 |
| 1．2 病毒的形态和理化特性 | 第15-16页 |
| 1．3 血清学 | 第16-17页 |
| 1．4 病毒与寄主间的互作 | 第17-18页 |
| 1．5 病害防治 | 第18页 |
| 1．6 分子生物学 | 第18-27页 |
| 1．6．1 基因组RNA的末端保守序列 | 第19-20页 |
| 1．6．2 基因组的结构、功能及表达策略 | 第20-22页 |
| 1．6．3 基因组的复制和转录机制 | 第22-23页 |
| 1．6．4 依赖RNA的RNA的聚合酶（RdRp） | 第23-24页 |
| 1．6．5 外壳蛋白（coat protein，CP） | 第24页 |
| 1．6．6 病害特异性蛋白（disease—specific protien，SP） | 第24-26页 |
| 1．6．7 其它可能编码的蛋白 | 第26-27页 |
| 1．7 病毒的进化 | 第27页 |
| 1．8 原生质体培养体系在植物病毒研究中的作用 | 第27-29页 |
| 1．9 农杆菌介导的水稻转化技术 | 第29-30页 |
| 1．10 存在问题与研究内容 | 第30-33页 |
| 2 水稻草矮病毒沙县分离物（RGSV-SX）基因组RNA1-3的cDNA克隆与序列分析 | 第33-81页 |
| 2．1 材料与方法 | 第33-37页 |
| 2．1．1 材料 | 第33-34页 |
| 2．1．1．1 毒源 | 第33页 |
| 2．1．1．2 菌株 | 第33页 |
| 2．1．1．3 引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| 2．1．1．4 试剂及酶类 | 第34页 |
| 2．1．2 方法 | 第34-37页 |
| 2．1．2．1 生物学接种 | 第34页 |
| 2．1．2．2 病毒提纯 | 第34-35页 |
| 2．1．2．3 病毒RNA提取 | 第35页 |
| 2．1．2．4 植物总核酸提取 | 第35页 |
| 2．1．2．5 病毒RNA的分段RT-PCR | 第35页 |
| 2．1．2．6 琼脂糖凝胶电泳及DNA片段的回收 | 第35-36页 |
| 2．1．2．7 PCR产物与克隆载体的连接 | 第36页 |
| 2．1．2．8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2．1．2．9 转化 | 第36页 |
| 2．1．2．10 质粒的提取 | 第36页 |
| 2．1．2．11 重组质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 2．1．2．12 核苷酸序列测定 | 第37页 |
| 2．1．2．13 序列分析与比较 | 第37页 |
| 2．2 结果与分析 | 第37-77页 |
| 2．2．1 RGSV-SX RNA1-3的分段RT-PCR及克隆策略 | 第37-41页 |
| 2．2．1．1 RGSV-RNA1片段的PCR产物及重组质粒酶切鉴定 | 第37-39页 |
| 2．2．1．2 RGSV-RNA2片段的PCR产物及重组质粒酶切鉴定 | 第39-41页 |
| 2．2．1．3 RGSV-RNA3片段的PCR产物及重组质粒酶切鉴定 | 第41页 |
| 2．2．2 RGSV-SX基因组RNA1-3的核苷酸序列分析 | 第41-46页 |
| 2．2．2．1 RGSV-SX RNA1片段的序列分析 | 第41-42页 |
| 2．2．2．2 RGSV-SX RNA2片段的序列分析 | 第42-43页 |
| 2．2．2．3 RGSV-SX RNA3片段的序列分析 | 第43-46页 |
| 2．2．3 RGSV-SX基因组RNA1-3所编码的氨基酸序列分析与同源性比较 | 第46-73页 |
| 2．2．3．1 RGSV-RNA1编码蛋白的氨基酸序列比较分析 | 第46-69页 |
| 2．2．3．2 RGSV-RNA2编码蛋白的氨基酸序列比较分析 | 第69-71页 |
| 2．2．3．3 RGSV-RNA3编码蛋白的氨基酸序列比较分析 | 第71-73页 |
| 2．2．4 RGSV RNA1-6三个分离物间核苷酸序列及所编码蛋白氨基酸序列同源性比较 | 第73-77页 |
| 2．3 讨论 | 第77-81页 |
| 3 RGSV NS3蛋白的原核表达及抗血清的制备 | 第81-89页 |
| 3．1 材料与方法 | 第81-83页 |
| 3．1．1 材料 | 第81页 |
| 3．1．1．1 引物 | 第81页 |
| 3．1．1．2 菌株 | 第81页 |
| 3．1．1．3 质粒、试剂及酶类 | 第81页 |
| 3．1．1．4 供试兔子 | 第81页 |
| 3．1．2 方法 | 第81-83页 |
| 3．1．2．1 NS3基因的克隆 | 第81页 |
| 3．1．2．2 原核表达载体的构建及重组质粒的筛选与鉴定 | 第81-82页 |
| 3．1．2．3 NS3基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第82页 |
| 3．1．2．4 蛋白的变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分析 | 第82页 |
| 3．1．2．5 NS3蛋白抗血清的制备 | 第82页 |
| 3．1．2．6 抗血清效价检测 | 第82页 |
| 3．1．2．7 Western blot检测病株、介体昆虫及提纯病毒中的NS3蛋白 | 第82-83页 |
| 3．2 结果与分析 | 第83-87页 |
| 3．2．1 NS3基因的克隆 | 第83页 |
| 3．2．2 NS3蛋白原核表达载体的构建及重组pGTNS3的筛选与鉴定 | 第83-84页 |
| 3．2．3 融合蛋白的诱导表达 | 第84-86页 |
| 3．2．4 GST-NS3蛋白抗血清的制备与效价测定 | 第86页 |
| 3．2．5 水稻和虫体内NS3基因产物的Western blot分析 | 第86-87页 |
| 3．3 讨论 | 第87-89页 |
| 4 RGSV在水稻原生质体内的复制与表达 | 第89-96页 |
| 4．1 材料与方法 | 第89-91页 |
| 4．1．1 材料 | 第89页 |
| 4．1．1．1 培养基 | 第89页 |
| 4．1．1．2 试剂 | 第89页 |
| 4．1．1．3 供试水稻品种 | 第89页 |
| 4．1．2 方法 | 第89-91页 |
| 4．1．2．1 水稻愈伤组织诱导 | 第89页 |
| 4．1．2．2 悬浮细胞系的建立 | 第89页 |
| 4．1．2．3 病毒提纯 | 第89页 |
| 4．1．2．4 原生质体病毒侵染体系的建立 | 第89-90页 |
| 4．1．2．4．1 原生质体的制备 | 第89-90页 |
| 4．1．2．4．2 RGSV接种原生质体 | 第90页 |
| 4．1．2．5 ELISA和Western blot检测RGSV对原生质体的侵染 | 第90-91页 |
| 4．1．2．5．1 细胞总蛋白的制备 | 第90页 |
| 4．1．2．5．2 ELISA检测RGSV在水稻原生质体中的表达 | 第90页 |
| 4．1．2．5．3 Western-blot检测RGSV编码蛋白在水稻原生质体中的表达 | 第90-91页 |
| 4．2 结果与分析 | 第91-94页 |
| 4．2．1 细胞悬浮培养系的建立 | 第91页 |
| 4．2．2 原生质体的分离和纯化 | 第91-92页 |
| 4．2．3 接种后原生质体总蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第92-93页 |
| 4．2．4 RGSV在水稻原生质体内的表达周期 | 第93页 |
| 4．2．5 RGSV编码蛋白在水稻原生质体内的表达周期 | 第93-94页 |
| 4．3 讨论 | 第94-96页 |
| 5 农杆菌介导的水稻草矮病毒对水稻的转化研究 | 第96-111页 |
| 5．1 材料与方法 | 第96-98页 |
| 5．1．1 材料 | 第96-97页 |
| 5．1．1．1 供试水稻品种 | 第96页 |
| 5．1．1．2 菌株 | 第96页 |
| 5．1．1．3 质粒 | 第96页 |
| 5．1．1．4 培养基的配制 | 第96页 |
| 5．1．1．5 试剂 | 第96-97页 |
| 5．1．2 方法 | 第97-98页 |
| 5．1．2．1 引物设计 | 第97页 |
| 5．1．2．2 NS3基因的植物表达载体构建 | 第97页 |
| 5．1．2．3 转化农杆菌 | 第97页 |
| 5．1．2．4 重组农杆菌PCR鉴定 | 第97-98页 |
| 5．2 农杆菌介导的病毒基因转化水稻 | 第98-100页 |
| 5．2．1 不同水稻品种胚性愈伤组织的诱导 | 第98页 |
| 5．2．2 根癌农杆菌的培养 | 第98页 |
| 5．2．3 愈伤组织与根癌农杆菌的共培养 | 第98页 |
| 5．2．4 抗性愈伤的筛选 | 第98页 |
| 5．2．5 影响抗性愈伤组织转化频率的几种因素 | 第98-99页 |
| 5．2．5．1 不同外植体来源（成熟胚、未成熟胚）对转化频率的影响 | 第98页 |
| 5．2．5．2 不同水稻品种愈伤组织的转化频率比较 | 第98页 |
| 5．2．5．3 愈伤组织预培养天数与转化频率的关系 | 第98页 |
| 5．2．5．4 愈伤组织与农杆菌的共培养时间对转化频率的影响 | 第98-99页 |
| 5．2．5．5 酚类化合物对农杆菌转化频率的影响 | 第99页 |
| 5．2．6 GUS基因的活性检测 | 第99页 |
| 5．2．7 抗性愈伤的分化培养 | 第99页 |
| 5．2．8 转基因植株的再生及幼苗移栽 | 第99页 |
| 5．2．9 转基因植株的检测 | 第99-100页 |
| 5．2．9．1 DNA探针的制备 | 第99页 |
| 5．2．9．2 植物总DNA的提取 | 第99页 |
| 5．2．9．3 RT-PCR及Southern点杂交 | 第99-100页 |
| 5．3 结果与分析 | 第100-108页 |
| 5．3．1 植物表达载体的构建 | 第100页 |
| 5．3．2 重组农杆菌的酶切鉴定 | 第100-101页 |
| 5．3．3 农杆菌介导的转化系统条件的优化 | 第101-104页 |
| 5．3．4 GUS基因活性检测 | 第104-106页 |
| 5．3．5 抗性愈伤的筛选及转基因植株的再生 | 第106页 |
| 5．3．6 RT-PCR及Southern点杂交检测 | 第106-108页 |
| 5．3．6．1 地高辛标记的cDNA探针 | 第106页 |
| 5．3．6．2 转化植株的PCR分析 | 第106-107页 |
| 5．3．6．3 Southern点杂交检测转基因再生植株 | 第107-108页 |
| 5．4 讨论 | 第108-111页 |
| 小结 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 附录1 缩写词和英汉对照 | 第129-132页 |
| 附录2 试验所用试剂及缓冲液配方 | 第132-140页 |
| 附录3 攻博期间发表（投稿）的论文 | 第140-141页 |
| 附录4 RGSV RNA1-6三个分离物间核苷酸序列同源性比较 | 第141-171页 |
