阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因的克隆与植物表达载体的构建
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1. 概述 | 第8-21页 |
| ·前言 | 第8-9页 |
| ·选题依据及目的意义 | 第9-10页 |
| ·选题依据 | 第9页 |
| ·研究目的意义 | 第9-10页 |
| ·芳香植物的研究现状 | 第10-13页 |
| ·我国芳香植物特点 | 第10页 |
| ·芳香植物应用发展现状 | 第10-12页 |
| ·药用价值的开发 | 第10-11页 |
| ·在食品工业方面的应用 | 第11页 |
| ·在园林上的应用 | 第11-12页 |
| ·我国芳香植物开发的前景探讨 | 第12-13页 |
| ·实行区域优化种植,拓宽芳香植物的园林应用范围 | 第12-13页 |
| ·加大科技投入,推动相关产业的发展 | 第13页 |
| ·加强宣传力度,保护芳香植物物种多样性 | 第13页 |
| ·芳香物质的分子机理研究进展 | 第13-19页 |
| ·芳香物质的合成途径 | 第13-16页 |
| ·萜类物质的生物合成 | 第13-16页 |
| ·芳香族类化合物的生物合成 | 第16页 |
| ·酚类、醇类、醛类等的生物合成 | 第16页 |
| ·芳香基因的克隆与转化的研究进展 | 第16-17页 |
| ·基因工程在植物芳香基因的遗传改良上的应用 | 第17-18页 |
| ·导入外源基因 | 第18页 |
| ·调控内源基因 | 第18页 |
| ·芳香基因分子机理研究存在的问题与展望 | 第18-19页 |
| ·芳香基因分子机理研究存在的问题 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化分子机理 | 第19-21页 |
| 2. 材料与方法 | 第21-29页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·实验所用试剂 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·常用的试剂 | 第21-23页 |
| ·RNA提取试剂 | 第21-22页 |
| ·质粒DNA提取试剂 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·阔叶薰衣草叶片总RNA的提取 | 第23页 |
| ·阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的克隆 | 第23-26页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第24页 |
| ·Lslis基因的扩增得到序列全长 | 第24页 |
| ·凝胶回收DNA片断 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第26页 |
| ·阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的生物信息学分析 | 第26页 |
| ·阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·碱裂解法质粒DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·质粒酶切反应 | 第27页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第27-29页 |
| ·电转农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·电击法转化农杆菌感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第28-29页 |
| 3. 结果与分析 | 第29-41页 |
| ·阔叶薰衣草叶片总RNA的提取 | 第29页 |
| ·阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的克隆 | 第29-36页 |
| ·阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的cDNA克隆 | 第29-30页 |
| ·阔叶薰衣草Lslis基因的序列和功能分析 | 第30-36页 |
| ·Lslis的序列分析和同源性分析 | 第30-35页 |
| ·Lslis与Lllis基因的二级结构预测 | 第35-36页 |
| ·阔叶薰衣草芳樟醇基因表达载体的构建 | 第36-40页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·质粒酶切反应 | 第37-39页 |
| ·Lslis基因表达载体构建 | 第39页 |
| ·植物表达载体鉴定 | 第39-40页 |
| ·Lslis植物表达载体转化农杆菌的鉴定 | 第40-41页 |
| 4. 讨论 | 第41-46页 |
| ·阔叶薰衣草总RNA提取过程中应注意的问题 | 第41页 |
| ·无RNase环境的创造和维持 | 第41页 |
| ·蛋白质、DNA、多糖等的去除 | 第41页 |
| ·质粒DNA提取过程中应注意的问题 | 第41-42页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA的优点 | 第41-42页 |
| ·菌液的浓度会影响质粒的提取效果 | 第42页 |
| ·去除蛋白质和RNA的影响 | 第42页 |
| ·PCR过程中应注意的问题 | 第42-43页 |
| ·引物的设计和筛选 | 第42页 |
| ·PCR过程中条件的摸索 | 第42-43页 |
| ·Lslis序列分析中发现的问题 | 第43-44页 |
| ·载体构建中需注意的问题 | 第44-45页 |
| ·酶切反应过程中需注意的问题 | 第44页 |
| ·连接反应中需注意的问题 | 第44-45页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第45页 |
| ·转化过程中需注意的问题 | 第45-46页 |
| 5. 结论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
