| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 1 前言 | 第7-26页 |
| 1．1 结核病的免疫 | 第8-11页 |
| 1．1．1 结核分枝杆菌的抗原构造 | 第8-9页 |
| 1．1．2 与结核免疫有关的T细胞表型和功能 | 第9-10页 |
| 1．1．3 针对结核病的细胞介导免疫 | 第10-11页 |
| 1．2 抗结核疫苗 | 第11-17页 |
| 1．2．1 卡介苗 | 第11-12页 |
| 1．2．2 结核病蛋白疫苗 | 第12-15页 |
| 1．2．3 结核病DNA疫苗 | 第15-16页 |
| 1．2．4 结核病转基因植物疫苗 | 第16-17页 |
| 1．3 粘膜免疫 | 第17-20页 |
| 1．3．1 粘膜免疫系统的组成 | 第17-18页 |
| 1．3．2 M细胞及功能 | 第18-19页 |
| 1．3．3 粘膜免疫应答机理 | 第19页 |
| 1．3．4 粘膜免疫应答的诱导 | 第19-20页 |
| 1．3．5 粘膜免疫应答中的淋巴细胞的归巢性 | 第20页 |
| 1．4 转基因植物疫苗 | 第20-26页 |
| 1．4．1 抗原的选定及其表达活性 | 第21-23页 |
| 1．4．2 受体植物种类的选定 | 第23-24页 |
| 1．4．3 高效表达载体的构建 | 第24-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-50页 |
| 2．1 材料与试剂 | 第26页 |
| 2．1．1 菌种和质粒 | 第26页 |
| 2．1．2 目的基因 | 第26页 |
| 2．1．3 试剂和药品 | 第26页 |
| 2．1．4 植物材料 | 第26页 |
| 2．2 植物表达载体的构建 | 第26-41页 |
| 2．2．1 引物的设计与合成 | 第26-27页 |
| 2．2．2 PCR扩增 | 第27页 |
| 2．2．3 PCR产物的回收 | 第27-28页 |
| 2．2．4 T-载体克隆与鉴定 | 第28-32页 |
| 2．2．4．1 PCR扩增产物与T-载体连接 | 第28-29页 |
| 2．2．4．2 宿主菌E．coli DH5α感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2．2．4．3 连接产物转化宿主菌E．coli DH5α的感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2．2．4．4 pEGM/E-6克隆载体质粒的酶切鉴定 | 第30-32页 |
| 2．2．5 pBI121/E-6中间表达载体的构建 | 第32-34页 |
| 2．2．5．1 线性化pBI121载体的制备 | 第32-33页 |
| 2．2．5．2 线性化载体与E-6基因片段的连接 | 第33页 |
| 2．2．5．3 pBI121/E-6重组载体的筛选 | 第33页 |
| 2．2．5．4 重组载体的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 2．2．6 pCAMBIA1300/E-6植物表达载体的构建 | 第34-37页 |
| 2．2．6．1 连有CaMV35S启动子和NOS终止子的E-6基因片段的制备 | 第34-35页 |
| 2．2．6．2 线性化载体pCAMBIA1300的制备 | 第35-36页 |
| 2．2．6．3 线性化载体pCAMBIA1300与E-6基因片段的连接 | 第36页 |
| 2．2．6．4 pCAMBIA1300/E-6重组载体的筛选、鉴定 | 第36页 |
| 2．2．6．5 pCAMBIA1300/E-6重组载体的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 2．2．7 农杆菌工程菌株的构建 | 第37-41页 |
| 2．2．7．1 农杆菌感受态的制备 | 第37页 |
| 2．2．7．2 植物表达载体pCAMBIA1300/E-6转化农杆菌EHA105 | 第37-38页 |
| 2．2．7．3 含pCAMBIA1300/E-6质粒的农杆菌工程菌的筛选与鉴定 | 第38-41页 |
| 2．3 植物基因转化 | 第41-43页 |
| 2．3．1 培养基 | 第41页 |
| 2．3．2 番木瓜潮霉素抗性梯度试验 | 第41-42页 |
| 2．3．3 利用叶盘法转化番木瓜 | 第42-43页 |
| 2．3．3．1 预培养 | 第42页 |
| 2．3．3．2 农杆菌侵染液的制备 | 第42页 |
| 2．3．3．3 侵染 | 第42-43页 |
| 2．3．4 抗性愈伤组织筛选 | 第43页 |
| 2．3．5 抗性愈伤组织诱导出芽 | 第43页 |
| 2．3．6 壮苗培养 | 第43页 |
| 2．3．7 转化植株的诱根培养 | 第43页 |
| 2．3．8 移栽 | 第43页 |
| 2．4 转基因植株的鉴定 | 第43-50页 |
| 2．4．1 植物总DNA的提取 | 第43-44页 |
| 2．4．2 PCR鉴定转基因植株 | 第44-45页 |
| 2．4．3 PCR-Southern Blot检测 | 第45-46页 |
| 2．4．4 Southern Blot检测 | 第46-47页 |
| 2．4．5 RNA dot blot检测 | 第47-50页 |
| 2．4．5．1 植物总RNA的提取 | 第47-49页 |
| 2．4．5．2 样品的准备及点样 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-54页 |
| 3．1 pCAMBIA1300/E-6植物表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3．2 农杆菌工程菌株的构建 | 第51页 |
| 3．3 外植体对潮霉素（Hyg）的敏感性 | 第51-52页 |
| 3．4 外植体的预培养 | 第52页 |
| 3．5 农杆菌的侵染与共培养 | 第52页 |
| 3．6 抗性愈伤组织的筛选 | 第52-53页 |
| 3．7 PCR检测和PCR-Southern blot检测 | 第53页 |
| 3．8 Southern blot检测 | 第53-54页 |
| 3．9 RNA dot blot检测 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 附图 | 第67-77页 |
| 英文摘要 | 第77-78页 |
