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外伤性脑损伤后血小板衍化生长因子的生物学作用实验研究

主要英文缩略词第1-10页
中文摘要第10-12页
英文摘要第12-15页
文献回顾第15-34页
 1 引言第15页
 2 PDGF的理化特性第15-20页
 3 PDGF的分布、表达及代谢第20-22页
   ·PDGF的分布第20页
   ·PDGF的表达第20-21页
   ·PDGF的代谢第21-22页
 4 PDGF的作用机制(包括受体)第22-25页
   ·PDGF受体第22-24页
   ·PDGF的作用机制第24-25页
 5 PDGF的生物学效应第25-27页
   ·PDGF的致分裂性和趋化性第25-26页
   ·PDGF对细胞周期的作用第26-27页
   ·PDGF对细胞外基质成分的调节作用第27页
 6 PDGF的临床意义第27-34页
   ·PDGF与创伤修复第27-28页
   ·PDGF与组织的生长发育第28-29页
   ·PDGF在中枢神经系统中的作用第29-34页
第一部分 猪血小板衍化生长因子的提纯及其理化性质的研究第34-54页
 实验一 PDGF的提纯第34-40页
  1 主要仪器和试剂第34-35页
  2 实验方法第35-36页
   ·猪血小板裂解液的制备第35页
   ·酸醇提取第35页
   ·DEAE-Sepharose离子交换层折第35-36页
   ·热处理第36页
   ·CM-Sepharose离心交换层折第36页
   ·Sephacryl S-100HR凝胶层析第36页
   ·蛋白含量测定第36页
   ·活性检测第36页
  3 实验结果第36-39页
   ·血小板裂解液的酸醇抽提第36-37页
   ·DEAE-Sepharose FF离子交换层析第37页
   ·热处理第37-38页
   ·CM-Sepharose FF离子交换层析第38页
   ·Sephacryl S-100 HR凝胶层析第38-39页
  4 讨论第39-40页
 实验二 PDGF生物学活性和理化性质测定第40-54页
  1 主要仪器和试剂第40-41页
  2 实验方法第41-45页
   ·pPDGF的SDS-PAGE分析第41-42页
   ·pPDGF的高压液相色谱分析第42-43页
   ·pPDGF的聚丙烯酸胺等电聚焦第43-44页
   ·pPDGF的氨基酸组成分析第44页
   ·生物学活性测定—pPDGF对NIH3T3细胞DNA合成的影响第44-45页
  3 实验结果第45-51页
   ·pPDGF的SDS聚丙稀酰胺凝胶电泳第45-46页
   ·pPDGF的高压液相色谱分析第46-47页
   ·pPDGF的等电聚焦(pI)分析第47-48页
   ·pPEX3F的氨基酸组成分析结果第48-49页
   ·生物学活性检测:pPDGF对NIH3T3细胞DNA合成的影响第49-51页
  4 讨论第51-54页
   ·pPDGF的理化性质和氨基酸组成第51-52页
   ·pPDGF的生物学活性第52-54页
第二部分 小鼠局灶性脑损伤后PDGF-A、PDGF-B链的mRNA及PDGFβ受体表达第54-63页
 实验一 小鼠局灶性脑损伤动物模型第54-55页
  1 实验对象第54-55页
  2 动物模型的制备第55页
  3 脑细胞标本的采取第55页
 实验二 小鼠局灶性损伤PDGF-A、PDGF-B链及PDGFβ受体表达第55-60页
  1 材料和方法第55-56页
   ·主要仪器设备第55页
   ·主要试剂第55-56页
  2 实验方法第56-60页
   ·主要液体配制第56-57页
   ·工作液第57-58页
   ·探针标记第58页
   ·原位杂交第58-60页
  3 实验结果第60页
 实验三 pPDGF对局灶性脑损伤胶质增生的影响第60-63页
  1 主要仪器及试剂第60-61页
  2 实验方法第61页
   ·制片第61页
   ·实验分组第61页
   ·GFAP在脑组织中的表达第61页
  3 实验结果第61-62页
  4 讨论第62-63页
第三部分 体外中枢源性细胞损伤模型的建立及PDGF对其损伤的保护作用研究第63-84页
 实验一 离体中枢神经细胞及胶质细胞损伤模型第63-68页
  1 主要试剂和仪器第63-64页
  2 实验方法第64-65页
   ·神经细胞培养第64页
   ·神经胶质细胞培养第64-65页
   ·细胞损伤第65页
   ·检测方法第65页
   ·统计学分析第65页
  3 实验结果第65-67页
   ·细胞膜损伤第65-66页
   ·LDH测定第66-67页
  4 讨论第67-68页
 实验二 pPDGF对皮层损伤神经元超氧化物歧化酶的影响第68-73页
  1 仪器及试剂第68页
  2 实验方法第68-69页
   ·分组第68-69页
   ·皮层神经细胞损伤模型第69页
   ·SOD测定第69页
   ·存活神经元计数第69页
   ·统计学处理第69页
  3 实验结果第69-72页
   ·pPDGF对SOD同功酶活性的影响第69-71页
   ·细胞存活百分比计数第71-72页
  4 讨论第72-73页
 实验三 PDGF对损伤性大脑皮层细胞钙通道的影响第73-84页
  1 主要仪器和试剂第74-75页
   ·实验对象第74页
   ·药品与试剂第74页
   ·实验器材第74-75页
   ·溶液配制第75页
  2 膜片钳技术第75-77页
   ·实验装置第75-76页
   ·全细胞记录方式第76-77页
   ·电压钳记录第77页
   ·实验数据处理第77页
  3 实验结果第77-82页
   ·皮层神经元基本电生理特性第77-79页
   ·PDGF对全细胞Ca~(2+)电流影响第79-82页
  4 讨论第82-84页
总结第84-85页
致谢第85-86页
参考文献第86-96页
附图第96-104页

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