| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 第一部分 Tim-4在小鼠巨噬细胞中的表达及阻断Tim-4对小鼠巨噬细胞RAW264.7生物学活性的影响 | 第18-24页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| ·细胞 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·试剂盒 | 第18页 |
| ·DNA分子量 | 第18页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第18-19页 |
| ·其他试剂 | 第19页 |
| ·主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-23页 |
| ·Tim-4在小鼠巨噬细胞中的表达 | 第20-22页 |
| ·RT-PCR检测小鼠巨噬细胞系RAW264.7 Tim-4 mRNA的表达 | 第20-22页 |
| ·流式细胞术检测小鼠巨噬细胞系RAW264.7 Tim-4蛋白的表达 | 第22页 |
| ·阻断Tim-4对小鼠巨噬细胞系RAW264.7生物学活性的影响 | 第22-23页 |
| ·Griess反应检测细胞培养上清中NO水平 | 第22页 |
| ·RT-PCR检测iNOS mRNA的表达 | 第22-23页 |
| ·统计学处理 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-24页 |
| ·Tim-4在小鼠巨噬细胞中的表达 | 第23页 |
| ·阻断Tim-4对小鼠巨噬细胞系RAW264.7生物学活性的影响 | 第23-24页 |
| 第二部分 稳定高表达Tim-4小鼠巨噬细胞系的建立及鉴定 | 第24-34页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·实验动物及来源 | 第24页 |
| ·质粒与菌种 | 第24页 |
| ·细胞 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·PCR引物 | 第24页 |
| ·DNA分子量Marker | 第24页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第24页 |
| ·其他试剂 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-32页 |
| ·pcDNA3.0-Tim-4重组体的构建 | 第25-30页 |
| ·Tim-4全基因片段的扩增 | 第25-26页 |
| ·Tim-4全基因片段的回收 | 第26页 |
| ·目的基因Tim-4与载体pcDNA3.0连接 | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27-28页 |
| ·阳性重组子的筛选与鉴定 | 第28-30页 |
| ·稳定高表达Tim-4小鼠巨噬细胞系的建立 | 第30-32页 |
| ·抽取与纯化质粒DNA | 第30-31页 |
| ·RAW264.7细胞培养 | 第31页 |
| ·脂质体转染 | 第31-32页 |
| ·稳定高表达Tim-4小鼠巨噬细胞系的鉴定 | 第32页 |
| ·RT-PCR检测Tim-4 mRNA的表达 | 第32页 |
| ·流式细胞术检测Tim-4蛋白的表达 | 第32页 |
| ·免疫细胞化学染色检测Tim-4蛋白的表达 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-34页 |
| ·pcDNA3.0-Tim-4重组体的鉴定 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR检测Tim-4 mRNA的表达 | 第33页 |
| ·流式细胞术检测Tim-4蛋白的表达 | 第33页 |
| ·免疫细胞化学染色检测Tim-4蛋白的表达 | 第33-34页 |
| 第三部分 Tim-4过表达对小鼠巨噬细胞系RAW264.7生物学活性的影响 | 第34-36页 |
| 1 材料 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-35页 |
| ·Griess反应检测细胞培养上清中NO水平 | 第34页 |
| ·RT-PCR检测iNOS及TNF-α mRNA的表达 | 第34页 |
| ·流式细胞术检测MHC-Ⅱ类分子及CD80、CD86的表达 | 第34页 |
| ·流式细胞术检测对FITC-Dextran的吞噬能力 | 第34-35页 |
| ·统计学处理 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-36页 |
| ·Tim-4过表达对小鼠巨噬细胞系RAW264.7分泌NO的影响 | 第35页 |
| ·Tim-4过表达对小鼠巨噬细胞系RAW264.7 iNOS及TNF-α mRNA表达的影响 | 第35页 |
| ·Tim-4过表达对小鼠巨噬细胞系RAW264.7 MHC-Ⅱ类分子及CD80、CD86表达的影响 | 第35页 |
| ·Tim-4过表达对小鼠巨噬细胞系RAW264.7吞噬FITC-Dextran能力的影响 | 第35-36页 |
| 讨论 | 第36-41页 |
| 附图 | 第41-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 质粒物理图谱 | 第51页 |
| NO检测标准曲线 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 发表文章 | 第57-58页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第58页 |
