| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 第一节 鱼类抗病毒的非特异性免疫机制研究进展 | 第11-18页 |
| 1. 自然杀伤细胞 | 第11-13页 |
| 2. 单核巨噬细胞系统 | 第13页 |
| 3. 干扰素 | 第13-16页 |
| 4. 结语 | 第16-18页 |
| 第二节 酵母双杂交系统的原理及研究进展 | 第18-22页 |
| 1. 酵母双杂交系统的构建原理 | 第18-19页 |
| 2. 酵母双杂交系统的发展 | 第19-22页 |
| 第二章 pDEST32-MCP 诱饵质粒的构建 | 第22-34页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-28页 |
| ·TRBIV MCP 基因的PCR 扩增 | 第23-25页 |
| ·pENTR-MCP 重组质粒的构建与扩增 | 第25-27页 |
| ·pDEST32-MCP 诱饵重组质粒的构建与扩增 | 第27-28页 |
| 2. 结果 | 第28-32页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·MCP 扩增结果 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的纯化与定量结果 | 第29-30页 |
| ·pENTR-MCP 的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·pENTR-MCP 的测序结果 | 第30页 |
| ·pDEST32-MCP 重组质粒的提取及酶切鉴定 | 第30-32页 |
| 3. 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 大菱鲆（Scophthalmus maxims）脾细胞cDNA 文库的构建 | 第34-48页 |
| 1. 材料与方法 | 第34-42页 |
| ·实验流程 | 第34页 |
| ·主要实验材料与试剂 | 第34-35页 |
| ·大菱鲆脾细胞总RNA 的提取和检测 | 第35-36页 |
| ·大菱鲆脾细胞mRNA 的分离与浓缩 | 第36-37页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第37页 |
| ·dsDNA 的合成与纯化 | 第37-38页 |
| ·在dsDNA 5’端加上att81 接头 | 第38-39页 |
| ·dsDNA 产物的纯化及定量 | 第39-40页 |
| ·dsDNA 与pDONR222 载体的重组及扩增 | 第40-41页 |
| ·文库的鉴定 | 第41-42页 |
| 2. 结果 | 第42-46页 |
| ·大菱鲆脾细胞总RNA 的提取及mRNA 的分离 | 第42-43页 |
| ·dsDNA 的合成 | 第43页 |
| ·cDNA 的纯化及定量 | 第43-44页 |
| ·cDNA 文库的构建及鉴定 | 第44-46页 |
| 3. 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 应用酵母双杂交技术筛选大菱鲆脾细胞cDNA 文库 | 第48-71页 |
| 第一节 pDEST32-MCP 与pDEST22-cDNA 文库的酵母双杂交实验 | 第48-57页 |
| 1. 材料与方法 | 第48-52页 |
| ·含pDEST32-MCP 诱饵质粒的酵母MaV203 的转化和筛选 | 第48-50页 |
| ·诱饵质粒的自激活性检测 | 第50页 |
| ·pDEST22-cDNA 文库的准备及酵母双杂交实验 | 第50-52页 |
| 2. 结果 | 第52-55页 |
| ·MaV203 中MCP 的PCR 鉴定 | 第52-53页 |
| ·诱饵蛋白的自激活测试 | 第53-54页 |
| ·pDEST32-MCP 诱饵质粒与pDEST22-cDNA 文库质粒的酵母双杂交实验 | 第54-55页 |
| 3. 讨论 | 第55-57页 |
| 第二节 阳性克隆的筛选鉴定及回复双杂交检测 | 第57-71页 |
| 1. 材料与方法 | 第57-59页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第57-58页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第58页 |
| ·cDNA 插入片段的测序 | 第58页 |
| ·cDNA 插入片段的生物信息学分析 | 第58-59页 |
| ·回复双杂交检测 | 第59页 |
| 2. 结果与分析 | 第59-68页 |
| ·阳性克隆的表型确认 | 第59-60页 |
| ·以酵母质粒为模板的 PCR 鉴定 | 第60-61页 |
| ·以大肠杆菌质粒为模板的 PCR 鉴定 | 第61-63页 |
| ·cDNA 插入片段的测序结果 | 第63-65页 |
| ·DNA 序列分析 | 第65页 |
| ·蛋白序列分析 | 第65-66页 |
| ·回复双杂交检测结果 | 第66-67页 |
| ·2，3，4，25 号菌株质粒的鉴定 | 第67页 |
| ·2，3，4，25 号自激活检测 | 第67-68页 |
| 3. 讨论 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
