摘要 | 第1-11页 |
Abstract | 第11-16页 |
前言 | 第16-21页 |
第一部分 S100A4 与 P53 蛋白在力竭运动氧化应激损伤心肌组织中的表达分布规律 | 第21-45页 |
实验研究一 大鼠力竭运动氧化应激致心血管损伤模型的建立 | 第21-35页 |
1. 材料与方法 | 第21-29页 |
·实验材料 | 第21-22页 |
·实验动物 | 第21页 |
·试剂与仪器 | 第21-22页 |
·主要实验方法 | 第22-29页 |
·运动氧化应激损伤模型的建立 | 第22-23页 |
·样本处理 | 第23-24页 |
·血液生化指标的测定 | 第24-26页 |
·组织形态学观察 | 第26-29页 |
2 统计分析 | 第29-30页 |
3. 实验结果 | 第30-34页 |
·生化指标检测结果 | 第30-32页 |
·力竭运动对大鼠血液中 LDH 活性的影响 | 第30页 |
·力竭运动对血液中 NO 含量的影响 | 第30-31页 |
·力竭运动对大鼠血液中MDA 含量的影响 | 第31-32页 |
·力竭运动对大鼠血液中SOD 活性的影响 | 第32页 |
·组织形态学观察 | 第32-34页 |
·光镜观察 | 第32-33页 |
·电镜观察 | 第33-34页 |
4. 小结 | 第34-35页 |
实验研究二 S100A4 和P53 蛋白在大鼠力竭运动氧化应激损伤心肌组织中的表达分布 | 第35-45页 |
1. 材料与方法 | 第35-40页 |
·实验材料 | 第35-36页 |
·实验动物 | 第35页 |
·试剂与仪器 | 第35-36页 |
·主要实验方法 | 第36-40页 |
·Western-Blot 鉴定 | 第36-37页 |
·S100A4 和 P53 蛋白的免疫组化检测 | 第37-40页 |
2 统计分析 | 第40-41页 |
3. 实验结果 | 第41-43页 |
·力竭运动后 S100A4 和 P53 在心肌组织中的表达变化 | 第41页 |
·力竭运动后 S100A4 和P53 在心肌组织中的免疫组化结果 | 第41-43页 |
·S100A4 蛋白免疫组化结果 | 第41-42页 |
·P53 免疫组化结果 | 第42-43页 |
4. 小结 | 第43-45页 |
第二部分 S100A4 蛋白的构建、表达、纯化与鉴定 | 第45-61页 |
1. 材料与方法 | 第46-53页 |
·实验材料 | 第46-47页 |
·质粒与菌株 | 第46页 |
·主要试剂 | 第46-47页 |
·主要仪器 | 第47页 |
·主要实验方法 | 第47-53页 |
·感受态细菌的制备方法(CaCL_2法) | 第47-48页 |
·转化方法 | 第48页 |
·S100A4 序列的优化设计与引物合成 | 第48-49页 |
·PCR 合成优化后S100A4 序列 | 第49页 |
·克隆载体pEasy-S100A4 的构建 | 第49-50页 |
·表达载体pBV220-S100A4 的构建 | 第50页 |
·pBV220-S100A4 的诱导表达 | 第50页 |
·重组蛋白鉴定 | 第50-52页 |
·重组S100A4 蛋白的纯化 | 第52页 |
·重组 S100A4 蛋白的脱盐 | 第52-53页 |
2 实验结果 | 第53-59页 |
·优化后的S100A4 序列 | 第53页 |
·合成序列的PCR 结果 | 第53-54页 |
·克隆载体pEasy-S100A4 鉴定 | 第54页 |
·S100A4 合成序列的测序结果 | 第54-55页 |
·表达载体pBV-220S100A4 的酶切鉴定 | 第55-56页 |
·S100A4 的诱导表达与表达形式分析 | 第56-57页 |
·重组蛋白的纯化 | 第57页 |
·重组蛋白的脱盐 | 第57-58页 |
·重组S100A4 蛋白的Western-blot 分析 | 第58-59页 |
3. 小结 | 第59-61页 |
第三部分 S100A4 蛋白对氧化应激内皮细胞凋亡调控的分子机制 | 第61-92页 |
实验研究一 体外培养大鼠主动脉内皮细胞氧化应激凋亡模型的建立 | 第61-76页 |
1 实验材料与仪器 | 第61-62页 |
·实验动物 | 第61-62页 |
·试剂 | 第61-62页 |
·仪器 | 第62页 |
2 实验方法 | 第62-66页 |
·大鼠主动脉内皮细胞的原代、传代培养、冻存和复苏及鉴定方法 | 第62-64页 |
·大鼠主动脉内皮细胞原代培养采用组织块培养法 | 第62-63页 |
·大鼠主动脉内皮细胞传代培养方法 | 第63页 |
·细胞冻存和复苏的方法 | 第63页 |
·Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定大鼠内皮细胞方法 | 第63-64页 |
·血管内皮细胞培养液中生化指标测定方法 | 第64页 |
·四唑盐(MTT)比色法检测血管内皮细胞存活率 | 第64页 |
·内皮细胞凋亡率的检测 | 第64-65页 |
·内皮细胞凋亡原位检测 | 第65-66页 |
3 统计分析 | 第66-67页 |
4 实验结果 | 第67-74页 |
·大鼠主动脉内皮细胞的原代培养 | 第67页 |
·大鼠主动脉内皮细胞免疫荧光鉴定 | 第67-68页 |
·H_2O_2对血管内皮细胞的损伤作用 | 第68-70页 |
·H_2O_2剂量效应曲线 | 第68-69页 |
·H_2O_2时间作用曲线 | 第69-70页 |
·生化指标检测 | 第70-72页 |
·H_2O_2对内皮细胞培养液中 LDH 活性的影响 | 第70页 |
·H_2O_2对内皮细胞培养液中NO 含量的影响 | 第70-71页 |
·H_2O_2对内皮细胞培养液中MDA 含量的影响 | 第71-72页 |
·H_2O_2对内皮细胞培养液中 SOD 活性的影响 | 第72页 |
·H_2O_2处理12h 后内皮细胞凋亡率的变化 | 第72-73页 |
·TUNEL 检测结果 | 第73-74页 |
5 小结 | 第74-76页 |
实验研究二 S100A4 蛋白对氧化应激致体外培养大鼠主动脉内皮细胞凋亡的分子调控 | 第76-92页 |
1 实验材料与仪器 | 第76-78页 |
·实验动物 | 第76页 |
·主要试剂和仪器 | 第76-78页 |
·试剂 | 第76-77页 |
·仪器 | 第77-78页 |
2 实验方法 | 第78-81页 |
·MTT 法检测内皮细胞存活率 | 第78页 |
·血管内皮细胞培养液中生化指标测定方法 | 第78页 |
·流式细胞术检测内皮细胞凋亡率 | 第78页 |
·TUNEL 原位检测内皮细胞凋亡 | 第78-79页 |
·内皮细胞全蛋白与核蛋白及胞浆蛋白制备方法 | 第79-80页 |
·Western-blot 法检测S100A4 和P53 蛋白的表达 | 第80-81页 |
3 统计分析 | 第81-82页 |
4 实验结果 | 第82-91页 |
·H_2O_2处理12h 后内皮细胞形态学变化 | 第82-83页 |
·S100A4 蛋白对氧化应激损伤内皮细胞存活率的影响 | 第83页 |
·生化指标检测 | 第83-87页 |
·S100A4 蛋白对氧化应激损伤内皮细胞培养液中LDH 活性的影响 | 第83-84页 |
·S100A4 蛋白对氧化应激损伤内皮细胞培养液中NO 含量的影响 | 第84-85页 |
·S100A4 对氧化应激损伤内皮细胞培养液中MDA 含量的影响 | 第85-86页 |
·S100A4 对氧化应激损伤内皮细胞培养液中SOD 活性的影响 | 第86-87页 |
·S100A4 对氧化应激损伤内皮细胞凋亡率的影响(流式细胞术检测) | 第87页 |
·S100A4 对氧化应激损伤内皮细胞凋亡率的影响(TUNEL 原位检测) | 第87-89页 |
·内皮细胞蛋白全蛋白、胞浆蛋白及核蛋白的western-blot 测定 | 第89-91页 |
5 小结 | 第91-92页 |
第四部分 分析与讨论 | 第92-99页 |
1 S100A4 和p53 蛋白在力竭运动氧化应激心肌组织中的表达分布规律 | 第92-94页 |
2 S100A4 蛋白的构建、表达、纯化与鉴定 | 第94-96页 |
3 S100A4 蛋白对氧化应激内皮细胞凋亡的调控机制研究 | 第96-99页 |
第五部分 结论 | 第99-100页 |
参考文献 | 第100-105页 |
致谢 | 第105-106页 |
附录 | 第106-108页 |
个人简介 | 第108页 |