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S100A4蛋白对运动氧化应激致心血管内皮细胞凋亡的分子调控

摘要第1-11页
Abstract第11-16页
前言第16-21页
第一部分 S100A4 与 P53 蛋白在力竭运动氧化应激损伤心肌组织中的表达分布规律第21-45页
 实验研究一 大鼠力竭运动氧化应激致心血管损伤模型的建立第21-35页
  1. 材料与方法第21-29页
   ·实验材料第21-22页
     ·实验动物第21页
     ·试剂与仪器第21-22页
   ·主要实验方法第22-29页
     ·运动氧化应激损伤模型的建立第22-23页
     ·样本处理第23-24页
     ·血液生化指标的测定第24-26页
     ·组织形态学观察第26-29页
  2 统计分析第29-30页
  3. 实验结果第30-34页
   ·生化指标检测结果第30-32页
     ·力竭运动对大鼠血液中 LDH 活性的影响第30页
     ·力竭运动对血液中 NO 含量的影响第30-31页
     ·力竭运动对大鼠血液中MDA 含量的影响第31-32页
     ·力竭运动对大鼠血液中SOD 活性的影响第32页
   ·组织形态学观察第32-34页
     ·光镜观察第32-33页
     ·电镜观察第33-34页
  4. 小结第34-35页
 实验研究二 S100A4 和P53 蛋白在大鼠力竭运动氧化应激损伤心肌组织中的表达分布第35-45页
  1. 材料与方法第35-40页
   ·实验材料第35-36页
     ·实验动物第35页
     ·试剂与仪器第35-36页
   ·主要实验方法第36-40页
     ·Western-Blot 鉴定第36-37页
     ·S100A4 和 P53 蛋白的免疫组化检测第37-40页
  2 统计分析第40-41页
  3. 实验结果第41-43页
   ·力竭运动后 S100A4 和 P53 在心肌组织中的表达变化第41页
   ·力竭运动后 S100A4 和P53 在心肌组织中的免疫组化结果第41-43页
     ·S100A4 蛋白免疫组化结果第41-42页
     ·P53 免疫组化结果第42-43页
  4. 小结第43-45页
第二部分 S100A4 蛋白的构建、表达、纯化与鉴定第45-61页
 1. 材料与方法第46-53页
   ·实验材料第46-47页
     ·质粒与菌株第46页
     ·主要试剂第46-47页
     ·主要仪器第47页
   ·主要实验方法第47-53页
     ·感受态细菌的制备方法(CaCL_2法)第47-48页
     ·转化方法第48页
     ·S100A4 序列的优化设计与引物合成第48-49页
     ·PCR 合成优化后S100A4 序列第49页
     ·克隆载体pEasy-S100A4 的构建第49-50页
     ·表达载体pBV220-S100A4 的构建第50页
     ·pBV220-S100A4 的诱导表达第50页
     ·重组蛋白鉴定第50-52页
     ·重组S100A4 蛋白的纯化第52页
     ·重组 S100A4 蛋白的脱盐第52-53页
 2 实验结果第53-59页
   ·优化后的S100A4 序列第53页
   ·合成序列的PCR 结果第53-54页
   ·克隆载体pEasy-S100A4 鉴定第54页
   ·S100A4 合成序列的测序结果第54-55页
   ·表达载体pBV-220S100A4 的酶切鉴定第55-56页
   ·S100A4 的诱导表达与表达形式分析第56-57页
   ·重组蛋白的纯化第57页
   ·重组蛋白的脱盐第57-58页
   ·重组S100A4 蛋白的Western-blot 分析第58-59页
 3. 小结第59-61页
第三部分 S100A4 蛋白对氧化应激内皮细胞凋亡调控的分子机制第61-92页
 实验研究一 体外培养大鼠主动脉内皮细胞氧化应激凋亡模型的建立第61-76页
  1 实验材料与仪器第61-62页
   ·实验动物第61-62页
     ·试剂第61-62页
     ·仪器第62页
  2 实验方法第62-66页
   ·大鼠主动脉内皮细胞的原代、传代培养、冻存和复苏及鉴定方法第62-64页
     ·大鼠主动脉内皮细胞原代培养采用组织块培养法第62-63页
     ·大鼠主动脉内皮细胞传代培养方法第63页
     ·细胞冻存和复苏的方法第63页
     ·Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定大鼠内皮细胞方法第63-64页
   ·血管内皮细胞培养液中生化指标测定方法第64页
   ·四唑盐(MTT)比色法检测血管内皮细胞存活率第64页
   ·内皮细胞凋亡率的检测第64-65页
   ·内皮细胞凋亡原位检测第65-66页
  3 统计分析第66-67页
  4 实验结果第67-74页
   ·大鼠主动脉内皮细胞的原代培养第67页
   ·大鼠主动脉内皮细胞免疫荧光鉴定第67-68页
   ·H_2O_2对血管内皮细胞的损伤作用第68-70页
     ·H_2O_2剂量效应曲线第68-69页
     ·H_2O_2时间作用曲线第69-70页
   ·生化指标检测第70-72页
     ·H_2O_2对内皮细胞培养液中 LDH 活性的影响第70页
     ·H_2O_2对内皮细胞培养液中NO 含量的影响第70-71页
     ·H_2O_2对内皮细胞培养液中MDA 含量的影响第71-72页
     ·H_2O_2对内皮细胞培养液中 SOD 活性的影响第72页
   ·H_2O_2处理12h 后内皮细胞凋亡率的变化第72-73页
   ·TUNEL 检测结果第73-74页
  5 小结第74-76页
 实验研究二 S100A4 蛋白对氧化应激致体外培养大鼠主动脉内皮细胞凋亡的分子调控第76-92页
  1 实验材料与仪器第76-78页
   ·实验动物第76页
   ·主要试剂和仪器第76-78页
     ·试剂第76-77页
     ·仪器第77-78页
  2 实验方法第78-81页
   ·MTT 法检测内皮细胞存活率第78页
   ·血管内皮细胞培养液中生化指标测定方法第78页
   ·流式细胞术检测内皮细胞凋亡率第78页
   ·TUNEL 原位检测内皮细胞凋亡第78-79页
   ·内皮细胞全蛋白与核蛋白及胞浆蛋白制备方法第79-80页
   ·Western-blot 法检测S100A4 和P53 蛋白的表达第80-81页
  3 统计分析第81-82页
  4 实验结果第82-91页
   ·H_2O_2处理12h 后内皮细胞形态学变化第82-83页
   ·S100A4 蛋白对氧化应激损伤内皮细胞存活率的影响第83页
   ·生化指标检测第83-87页
     ·S100A4 蛋白对氧化应激损伤内皮细胞培养液中LDH 活性的影响第83-84页
     ·S100A4 蛋白对氧化应激损伤内皮细胞培养液中NO 含量的影响第84-85页
     ·S100A4 对氧化应激损伤内皮细胞培养液中MDA 含量的影响第85-86页
     ·S100A4 对氧化应激损伤内皮细胞培养液中SOD 活性的影响第86-87页
   ·S100A4 对氧化应激损伤内皮细胞凋亡率的影响(流式细胞术检测)第87页
   ·S100A4 对氧化应激损伤内皮细胞凋亡率的影响(TUNEL 原位检测)第87-89页
   ·内皮细胞蛋白全蛋白、胞浆蛋白及核蛋白的western-blot 测定第89-91页
  5 小结第91-92页
第四部分 分析与讨论第92-99页
 1 S100A4 和p53 蛋白在力竭运动氧化应激心肌组织中的表达分布规律第92-94页
 2 S100A4 蛋白的构建、表达、纯化与鉴定第94-96页
 3 S100A4 蛋白对氧化应激内皮细胞凋亡的调控机制研究第96-99页
第五部分 结论第99-100页
参考文献第100-105页
致谢第105-106页
附录第106-108页
个人简介第108页

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