| 摘要 | 第1-5页 |
| Summary | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-25页 |
| 1 脲酶 | 第10-15页 |
| ·细菌脲酶的生化性质 | 第10-12页 |
| ·细菌脲酶基因簇 | 第12-13页 |
| ·结构基因 | 第12页 |
| ·辅助基因 | 第12-13页 |
| ·调节基因 | 第13页 |
| ·细菌脲酶是镍金属蛋白酶 | 第13-14页 |
| ·细菌脲酶的表达调控方式 | 第14-15页 |
| ·氮对脲酶表达的调控 | 第14页 |
| ·尿素诱导的调控 | 第14-15页 |
| ·pH值调控 | 第15页 |
| ·组成型调控 | 第15页 |
| 2 脂肪酶 | 第15-20页 |
| ·脂肪酶来源 | 第15-16页 |
| ·pH和温度动力学 | 第16页 |
| ·在有机溶剂里的稳定性 | 第16页 |
| ·金属离子的影响 | 第16页 |
| ·脂肪酶的抑制剂 | 第16-17页 |
| ·非特异性可逆抑制剂 | 第16页 |
| ·特异性抑制剂 | 第16-17页 |
| ·底物特异性 | 第17-20页 |
| 3 元基因组学 | 第20-24页 |
| ·元基因组学研究方法 | 第20-22页 |
| ·功能驱动筛选法 | 第20-21页 |
| ·序列驱动筛选法 | 第21页 |
| ·样品富集技术 | 第21页 |
| ·基因富集技术 | 第21-22页 |
| ·胃肠道微生物元基因组学 | 第22页 |
| ·瘤胃微生物元基因组学 | 第22-24页 |
| ·筛选功能活性物质 | 第22-23页 |
| ·基因组序列分析 | 第23-24页 |
| 4 研究目的和意义 | 第24页 |
| 5 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 奶牛瘤胃微生物BAC文库中脲酶克隆的筛选与分析 | 第25-32页 |
| 1 材料与方法 | 第25-27页 |
| ·菌株来源 | 第25页 |
| ·奶牛瘤胃微生物BAC文库 | 第25页 |
| ·脲酶阳性克隆的筛选 | 第25-26页 |
| ·脲酶选择性培养基 | 第25-26页 |
| ·脲酶阳性克隆筛选 | 第26页 |
| ·脲酶阳性克隆片段大小的鉴定 | 第26页 |
| ·脲酶阳性克隆酶切鉴定 | 第26页 |
| ·脲酶活性测定 | 第26页 |
| ·脲酶蛋白提取 | 第26页 |
| ·脲酶活性测定 | 第26页 |
| ·脲酶的最适pH调整 | 第26页 |
| ·脲酶的最适温度 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-30页 |
| ·筛选脲酶阳性克隆 | 第27-28页 |
| ·脲酶阳性克隆的培养筛选 | 第27页 |
| ·脲酶阳性克隆片段大小 | 第27-28页 |
| ·脲酶阳性克隆酶切图谱 | 第28页 |
| ·脲酶阳性克隆酶活力测定 | 第28-29页 |
| ·脲酶的最适pH | 第29页 |
| ·脲酶的最适温度 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| ·奶牛瘤胃微生物BAC文库中筛选脲酶克隆 | 第30页 |
| ·脲酶克隆酶活力的差异 | 第30-31页 |
| ·脲酶的最适pH和温度 | 第31页 |
| 4 结论 | 第31-32页 |
| 第三章 元基因组学方法分析奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性 | 第32-39页 |
| 1 材料与方法 | 第32-34页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·样品菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第32页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第32-33页 |
| ·脲酶基因克隆文库的建立 | 第33页 |
| ·脲酶ureC基因的PCR扩增 | 第33页 |
| ·克隆文库的建立 | 第33页 |
| ·16S rDNA文库建立 | 第33页 |
| ·基因测序和系统发育分析 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-37页 |
| ·ureC和16s rDNA克隆文库 | 第34页 |
| ·ureC系统发育分析 | 第34页 |
| ·16S rDNA系统发育分析 | 第34-35页 |
| ·核酸序列登录号 | 第35-37页 |
| 3 讨论 | 第37-38页 |
| 4 结论 | 第38-39页 |
| 第四章 奶牛瘤胃微生物元基因组文库中脂肪酶克隆的筛选与酶学性质 | 第39-46页 |
| 1 材料与方法 | 第39-41页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·脂肪酶阳性克隆筛选 | 第39-40页 |
| ·脂肪酶选择性筛选培养基制备 | 第39页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第39-40页 |
| ·脂肪酶阳性克隆插入片段大小的鉴定 | 第40页 |
| ·脂肪酶阳性克隆限制性酶切图谱 | 第40页 |
| ·脂肪酶活性测定 | 第40页 |
| ·脂肪酶提取 | 第40页 |
| ·脂肪酶活性测定 | 第40页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第40页 |
| ·脂肪酶的最适pH | 第40-41页 |
| ·脂肪酶的热稳定性 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-45页 |
| ·脂肪酶阳性克隆的筛选 | 第41-42页 |
| ·表型 | 第41页 |
| ·脂肪酶克隆插入片段大小 | 第41-42页 |
| ·脂肪酶阳性克隆酶切图谱 | 第42页 |
| ·脂肪酶酶活性 | 第42-43页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第43-44页 |
| ·脂肪酶的最适pH | 第44页 |
| ·脂肪酶热稳定性 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 总体结论和展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 个人简历 | 第59-60页 |
| 导师简历 | 第60-62页 |
