| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1. 流感概述 | 第12页 |
| 2. 禽流感概述 | 第12-13页 |
| 3. 禽流感病毒 | 第13-17页 |
| ·禽流感病毒的形态和结构 | 第13-14页 |
| ·禽流感病毒的分类和命名 | 第14页 |
| ·禽流感病毒的各节段基因与产物 | 第14-15页 |
| ·禽流感病毒的增殖 | 第15-17页 |
| ·禽流感病毒的抗原性变异 | 第17页 |
| 4. 神经氨酸酶概述 | 第17-20页 |
| ·神经氨酸酶的结构 | 第17-18页 |
| ·神经氨酸酶的分子生物学功能 | 第18-20页 |
| 5. 神经氨酸酶的研究现状 | 第20-22页 |
| ·NA 基因改造的研究 | 第20页 |
| ·NA 免疫学功能的研究 | 第20-21页 |
| ·NA 抑制剂的研究 | 第21-22页 |
| 6. 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 NA 基因的克隆、序列分析及原核表达 | 第23-33页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-26页 |
| ·菌种与质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| ·NA 基因的PCR 定点诱变 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·NA 基因的T-A 克隆 | 第25页 |
| ·NA 基因序列分析 | 第25页 |
| ·重组表达载体pGEX-NA 的构建 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第26页 |
| 2. 试验结果 | 第26-31页 |
| ·NA 基因的PCR 定点诱变 | 第26-27页 |
| ·NA 基因的T-A 克隆 | 第27-28页 |
| ·NA 基因核苷酸及其推导的氨基酸序列分析 | 第28-29页 |
| ·表达质粒pGEX-NA 的鉴定 | 第29页 |
| ·表达产物的可溶性分析与SDS-PAGE 检测 | 第29-30页 |
| ·表达产物的Western Blot 检测 | 第30-31页 |
| 3. 分析与讨论 | 第31-32页 |
| 4. 结论 | 第32-33页 |
| 第三章 神经氨酸酶基因表达质粒免疫小鼠的研究 | 第33-41页 |
| 1. 材料与方法 | 第33-36页 |
| ·质粒、细胞及菌种 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·实验动物 | 第33-34页 |
| ·pcDNA3.0-NA 重组质粒的构建 | 第34页 |
| ·重组质粒的线性化及纯化 | 第34页 |
| ·PEI 介导重组质粒转染NIH-3T3 细胞 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR 检测细胞的转染 | 第35页 |
| ·IFA 检测重组NA 蛋白的表达 | 第35页 |
| ·实验动物分组及免疫 | 第35页 |
| ·抗血清的收集及免疫效应分析 | 第35-36页 |
| ·统计分析 | 第36页 |
| 2. 试验结果 | 第36-39页 |
| ·重组质粒pcDNA3.0-NA 的鉴定 | 第36页 |
| ·RT-PCR 检测细胞转染 | 第36-37页 |
| ·IFA 检测重组NA 蛋白的表达 | 第37页 |
| ·血清抗体检测结果 | 第37-39页 |
| 3. 分析与讨论 | 第39-40页 |
| ·体外转染重组质粒的表达 | 第39页 |
| ·影响基因免疫效果的因素 | 第39-40页 |
| ·核酸疫苗免疫效应分析 | 第40页 |
| 4. 结论 | 第40-41页 |
| 第四章 体外重组 NA 的表达及其亚细胞定位研究 | 第41-49页 |
| 1. 材料和方法 | 第41-43页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·引物的设计与合成 | 第41-42页 |
| ·PCR 扩增EGFP 基因 | 第42页 |
| ·融合表达载体pcDNA3.0/EGFP-NA 的构建 | 第42页 |
| ·NA 蛋白的跨膜区分析 | 第42-43页 |
| ·重组质粒转染NIH-3T3 细胞 | 第43页 |
| ·RT-PCR 检测细胞转染 | 第43页 |
| ·IFA 检测重组NA 的表达 | 第43页 |
| 2. 试验结果 | 第43-47页 |
| ·EGFP 基因的PCR 扩增 | 第43-44页 |
| ·pcDNA3.0/EGFP-NA 的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·NA 蛋白的跨膜区分析 | 第44-45页 |
| ·质粒转染NIH-3T3 细胞的检测结果 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR 检测细胞转染 | 第46页 |
| ·IFA 检测重组NA 蛋白的表达 | 第46-47页 |
| 3. 分析与讨论 | 第47-48页 |
| 4. 结论 | 第48-49页 |
| 第五章 神经氨酸酶抗病活性的研究 | 第49-59页 |
| 1. 材料和方法 | 第49-53页 |
| ·载体、菌株、细胞及病毒 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·G418 对NIH-3T3 细胞最小致死量测定 | 第49-50页 |
| ·pcDNA3.0-NA 转染NIH-3T3 细胞 | 第50页 |
| ·抗性细胞的筛选 | 第50页 |
| ·RT-PCR 检测NIH-3T3 细胞的转染 | 第50页 |
| ·Western blot 检测表达产物 | 第50页 |
| ·新城疫病毒的接种培养与获取 | 第50-51页 |
| ·新城疫病毒血凝效价的测定 | 第51页 |
| ·制备单层CEF 细胞 | 第51-52页 |
| ·新城疫病毒感作CEF 及TCID50 的测定 | 第52页 |
| ·抗新城疫病毒活性试验 | 第52-53页 |
| 2. 试验结果 | 第53-57页 |
| ·G418 对NIH-3T3 细胞最小致死量的确定 | 第53页 |
| ·G418 筛选NIH-3T3 细胞的阳性克隆 | 第53页 |
| ·RT-PCR 检测转染NA 基因的表达 | 第53页 |
| ·Western blot 检测重组NA 蛋白的表达 | 第53-54页 |
| ·新城疫病毒血凝效价的测定 | 第54页 |
| ·新城疫病毒 TCID50 测定 | 第54-56页 |
| ·抗新城疫病毒活性检测 | 第56-57页 |
| 3. 分析与讨论 | 第57-58页 |
| 4. 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录1 | 第65-66页 |
| 附录2 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第68页 |
