| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| 1 奶牛乳腺上皮细胞原代培养研究进展 | 第9-12页 |
| ·奶牛乳腺的结构研究及其意义 | 第9页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞体外培养的意义 | 第9-10页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞原代培养研究概况 | 第10-12页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞原代培养发展史 | 第10页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的获得方法 | 第10-11页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞体外培养体系 | 第11页 |
| ·原代培养的意义 | 第11-12页 |
| 2 细胞热应激 | 第12-16页 |
| ·热应激与热休克蛋白 | 第12-13页 |
| ·热休克蛋白的分类 | 第12-13页 |
| ·HSPs 的生物学功能 | 第13页 |
| ·应激反应 | 第13-14页 |
| ·应激反应的转录调节 | 第14页 |
| ·热休克转录因子HSFs | 第14页 |
| ·应激反应的翻译调节 | 第14-15页 |
| ·家畜热休克mRNA 和HSPs 的表达 | 第15-16页 |
| 第二章 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养及鉴定 | 第16-21页 |
| 1 材料与方法 | 第16-19页 |
| ·试验材料 | 第16-18页 |
| ·细胞来源 | 第16页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第16页 |
| ·试验所用溶液及其配置 | 第16-18页 |
| ·细胞原代培养 | 第18页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白检验 | 第18-19页 |
| 2 结果与讨论 | 第19-20页 |
| ·原代培养的奶牛乳腺上皮细胞72h 形态鉴定与讨论 | 第19-20页 |
| ·β-酪蛋白的检测结果与讨论 | 第20页 |
| 3 小结 | 第20-21页 |
| 第三章 热应激对奶牛乳腺上皮细胞的HSP70mRNA 表达量的影响 | 第21-31页 |
| 1 材料和方法 | 第21-25页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞 | 第21页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第21页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第21页 |
| ·2%琼脂糖凝胶配制 | 第21页 |
| ·LB 培养基配制 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-25页 |
| ·乳腺上皮细胞的高温热应激 | 第21-22页 |
| ·总RNA 的提取 | 第22页 |
| ·反转录（20μL 反应体系） | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·PCR 扩增 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第23页 |
| ·回收产物与pGEM-T 载体的重组连接 | 第23页 |
| ·连接物的转化 | 第23-24页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第24页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第24页 |
| ·序列测定与分析 | 第24页 |
| ·ReaL time FQ-PCR | 第24-25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-29页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第25页 |
| ·菌液PCR 结果 | 第25页 |
| ·酶切结果 | 第25-27页 |
| ·测序结果 | 第27页 |
| ·标准曲线的建立 | 第27-28页 |
| ·样品定量分析 | 第28-29页 |
| ·单一高温处理法 | 第28页 |
| ·连续高温处理法 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| ·热应激对HSP70 基因表达的影响 | 第29页 |
| ·HSP70 基因的表达与热耐受性的产生 | 第29页 |
| ·HSP70 与细胞凋亡 | 第29-30页 |
| 4 小结 | 第30页 |
| 5 试验创新点 | 第30页 |
| 6 存在问题 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-35页 |
| 在读期间发表的论文 | 第35-36页 |
| 作者简介 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |