| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第11-20页 |
| 1.1 肿瘤的基因治疗 | 第11-17页 |
| 1.1.1 反义核酸 | 第12页 |
| 1.1.2 核酶 | 第12页 |
| 1.1.3 规律成簇间隔短回文重复CRISPR相关蛋白核酸酶 | 第12-13页 |
| 1.1.4 RNA干扰 | 第13-15页 |
| 1.1.5 血管内皮生长因子作用及意义 | 第15-17页 |
| 1.2 siRNA药物的体内输送 | 第17-18页 |
| 1.2.1 siRNA药物肿瘤靶向输送的困难和挑战 | 第17页 |
| 1.2.2 siRNA药物输送策略 | 第17-18页 |
| 1.3 基于载荷VEGF-多功能自组装纳米系统的肺癌靶向治疗研究 | 第18-20页 |
| 第二章 自组装纳米粒子制备与表征 | 第20-40页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.3 试验用试剂的配置 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.3.1 6-OTs-β-CD和CD-PEI的合成及表征 | 第21-22页 |
| 2.3.2 Ad-PEG-GE11和Ad-PEG-GALA的合成及表征 | 第22-23页 |
| 2.3.3 不同粒径粒径DNA@SNPs的制备 | 第23页 |
| 2.3.4 GE11/GALA-DNA@SNPs粒径分布及电势分析 | 第23页 |
| 2.3.5 原子力显微镜观察GE11/GALA-DNA@SNPs形貌 | 第23页 |
| 2.3.6 GE11/GALA-DNA@SNPs冰冻透射显微镜表征 | 第23-24页 |
| 2.3.7 自组装纳米粒子载荷DNA研究 | 第24页 |
| 2.3.8 GE11/GALA-DNA@SNPs稳定性研究 | 第24-25页 |
| 2.4 shRNA片段设计 | 第25-28页 |
| 2.4.1 基于pGPHI/GFP/Neo质粒载体的shRNA片段设计原则 | 第25页 |
| 2.4.2 靶序列的选择 | 第25-26页 |
| 2.4.3 表达载体构建 | 第26-28页 |
| 2.5 实验结果 | 第28-39页 |
| 2.5.1 6-OTs-β-CD及CD-PEI的~1H NMR表征 | 第28-30页 |
| 2.5.2 Ad-PEG的多肽修饰表征 | 第30-34页 |
| 2.5.3 不同粒径DNA@SNPs的制备 | 第34-35页 |
| 2.5.4 GE11/GALA-DNA@SNPs纳米粒子表征 | 第35-37页 |
| 2.5.5 DNA@SNPs载荷验证 | 第37-38页 |
| 2.5.6 GE11/GALA-DNA@SNPs在PBS中的稳定性 | 第38页 |
| 2.5.7 shRNA表达载体测序结果 | 第38-39页 |
| 2.6 总结与讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 自组装纳米粒子载荷DNA体外基因转染效率研究 | 第40-54页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第40-41页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第41页 |
| 3.2.3 实验用试剂的配置 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-47页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第41页 |
| 3.3.2 靶向肽GE11修饰的GE11-DNA@SNPs与细胞的结合研究 | 第41-42页 |
| 3.3.3 不同浓度穿膜肽GALA对GALA-DNA@SNPs转染效果的影响 | 第42页 |
| 3.3.4 不同N/P对GALA-DNA@SNPs转染效果的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.5 不同功能化修饰的DNA@SNPs转染效果对比 | 第43-44页 |
| 3.3.6 GE11/GALA-DNA@SNPs介导的GFP质粒DNA转染 | 第44页 |
| 3.3.7 GE11/GALA-DNA@SNPs细胞摄取实验 | 第44-45页 |
| 3.3.8 不同DNA@SNPs的细胞毒性评价 | 第45-46页 |
| 3.3.9 GE11/GALA-VEGF-shRNA@SNPs体外抑制肿瘤细胞VEGF表达评价 | 第46-47页 |
| 3.4 实验结果 | 第47-53页 |
| 3.4.1 靶向肽GE11修饰的GE11-DNA@SNPs与细胞结合特异性研究 | 第47-48页 |
| 3.4.2 GE11/GALA-DNA@SNPs细胞转染实验 | 第48-51页 |
| 3.4.3 GE11/GALA-DNA@SNPs细胞摄取实验 | 第51页 |
| 3.4.4 不同DNA@SNPs细胞毒性评价 | 第51-52页 |
| 3.4.5 自组装纳米粒子载荷VEGF-shRNA抑制肿瘤细胞VEGF表达评价 | 第52-53页 |
| 3.5 总结与讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 自组装纳米粒子荷瘤裸鼠体内药效考察 | 第54-62页 |
| 4.1 前言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第54-55页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第55页 |
| 4.2.3 实验用试剂的配置 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.3.1 裸鼠皮下瘤模型构建、给药和治疗效果评价 | 第55-56页 |
| 4.3.2 瘤内VEGF水平检测 | 第56-57页 |
| 4.3.3 肿瘤组织切片CD31免疫组化染色 | 第57-58页 |
| 4.4 实验结果 | 第58-61页 |
| 4.4.1 GE11/GALA-VEGF-shRNA@SNPs的肿瘤生长抑制作用 | 第58-59页 |
| 4.4.2 GE11/GALA-VEGF-shRNA@SNPs对瘤内VEGF表达的抑制 | 第59-60页 |
| 4.4.3 GE11/GALA-VEGF-shRNA@SNPs抑制皮下瘤新生血管生成 | 第60-61页 |
| 4.5 总结与讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 总结与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 总结 | 第62-63页 |
| 5.2 研究工作展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第71-73页 |
