| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-17页 |
| 1.1 角膜结构的国内外研究现状 | 第13-14页 |
| 1.1.1 角膜正常结构 | 第13页 |
| 1.1.2 角膜基质层 | 第13页 |
| 1.1.3 角膜神经分布 | 第13-14页 |
| 1.1.4 角膜神经的来源和观察 | 第14页 |
| 1.1.5 角膜神经损伤修复 | 第14页 |
| 1.2 神经内分泌细胞的国内外研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2.1 神经内分泌细胞 | 第14-15页 |
| 1.2.2 神经内分泌细胞的观察方法 | 第15页 |
| 1.2.3 神经内分泌细胞在体内的分布 | 第15页 |
| 1.2.4 CaMK2 | 第15页 |
| 1.3 研究内容和目标 | 第15页 |
| 1.4 本研究的创新之处 | 第15-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-23页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第17页 |
| 2.1.2 主要实验试剂与耗材 | 第17-19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19-21页 |
| 2.1.4 抗体 | 第21-22页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-38页 |
| 2.2.1 实验主要溶液的配置 | 第23-26页 |
| 2.2.1.1 酶解法去角膜上皮相关溶液 | 第23页 |
| 2.2.1.2 扫描电镜样本制备相关溶液 | 第23-24页 |
| 2.2.1.3 组织、切片染色相关溶液 | 第24-25页 |
| 2.2.1.4 蛋白质提取及电泳相关溶液 | 第25-26页 |
| 2.2.1.5 动物模型相关试剂 | 第26页 |
| 2.2.1.6 基因型鉴定相关溶液 | 第26页 |
| 2.2.2 主要实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.2.1 使用Dispase Ⅱ酶解法制备GFP大鼠去上皮角膜平铺片 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 使用DispaseⅡ酶解法制备GFP大鼠去上皮角膜平铺片免疫荧光化学染色 | 第27页 |
| 2.2.2.3 大鼠角膜扫描电镜样本制备 | 第27-28页 |
| 2.2.2.4 qRT-PCR检测基因转录水平 | 第28-30页 |
| 2.2.2.4.1 组织RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2.4.2 反转录 | 第29-30页 |
| 2.2.2.4.3 qRT-PCR | 第30页 |
| 2.2.2.5 蛋白免疫印迹法(Western Blotting) | 第30-35页 |
| 2.2.2.6 冰冻切片 | 第35页 |
| 2.2.2.7 冰冻切片免疫荧光化学染色 | 第35页 |
| 2.2.2.8 CaMK2α -cre mTmG(F/-)小鼠的鉴定 | 第35-37页 |
| 2.2.2.9 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| 2.2.2.10 动物实验 | 第37-38页 |
| 2.2.2.10.1 GFP大鼠Alloxan前房注射模型 | 第37-38页 |
| 2.2.2.10.2 GFP大鼠碱烧伤模型 | 第38页 |
| 2.2.2.10.3 loxp-cre系统构建模型鼠 | 第38页 |
| 2.3 实验数据处理和统计学分析 | 第38-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-58页 |
| 3.1 角膜基质中存在特殊类型的细胞 | 第40-46页 |
| 3.1.1 角膜基质中特殊类型细胞的形态 | 第40-42页 |
| 3.1.2 角膜基质中特殊类型细胞的联结 | 第42-46页 |
| 3.1.2.1 共聚焦显微镜的检测 | 第42-43页 |
| 3.1.2.2 扫描电镜的检测 | 第43-44页 |
| 3.1.2.3 禽类角膜基质中不存在这类特殊细胞 | 第44-46页 |
| 3.2 角膜基质特殊类型细胞的鉴定 | 第46-49页 |
| 3.2.1 qRT-PCR和Western Blot检测 | 第46-47页 |
| 3.2.2 免疫荧光染色的共聚焦显微镜检测 | 第47-49页 |
| 3.3 角膜神经内分泌细胞与胰岛细胞的比较 | 第49-52页 |
| 3.3.1 胰岛细胞免疫荧光染色的共聚焦显微镜检测 | 第49-51页 |
| 3.3.2 大鼠角膜基质平铺片免疫荧光双染共聚焦显微铙检测 | 第51-52页 |
| 3.4 角膜基质中神经内分泌细胞和角膜神经的关系 | 第52-54页 |
| 3.4.1 角膜基质中的神经内分泌细胞并非来自三叉神经节 | 第52-53页 |
| 3.4.2 角膜基质中的神经内分泌细胞与角膜神经的关系 | 第53-54页 |
| 3.4.2.1 共聚焦显微镜检测 | 第53-54页 |
| 3.5 角膜基质中神经内分泌细胞的损伤对角膜的影响 | 第54-58页 |
| 3.5.1 裂隙灯检测 | 第54-56页 |
| 3.5.2 共聚焦显微镜检测 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 附录一 英文缩略索引 | 第63-64页 |
| 附录二 在学期间发表论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
