| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 上篇 文献综述 | 第12-29页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1 番茄斑萎病毒的研究概况 | 第13-18页 |
| 1.1 番茄斑萎病毒的分类地位 | 第13页 |
| 1.2 番茄斑萎病毒的发生流行与危害 | 第13-14页 |
| 1.3 番茄斑萎病毒的病原形态与基因组结构 | 第14-15页 |
| 1.4 番茄斑萎病毒的危害症状 | 第15-16页 |
| 1.5 番茄斑萎病毒的传播介体和防治措施 | 第16-17页 |
| 1.6 番茄斑萎病毒的检测方法 | 第17-18页 |
| 1.6.1 指示植物检测法 | 第17页 |
| 1.6.2 电子显微镜检测法 | 第17页 |
| 1.6.3 血清学技术检测法 | 第17-18页 |
| 1.6.4 分子生物学技术检测法 | 第18页 |
| 2 基于质谱的蛋白组学研究进展 | 第18-20页 |
| 2.1 蛋白质组学简介 | 第18页 |
| 2.2 生物质谱技术 | 第18-19页 |
| 2.3 质谱法鉴定蛋白质 | 第19-20页 |
| 3 植物体内的膜泡运输 | 第20-23页 |
| 3.1 衣被类型 | 第21-23页 |
| 3.2 衣被的形成 | 第23页 |
| 4 蛋白质互作的研究方法 | 第23-26页 |
| 4.1 酵母双杂交技术 | 第24-25页 |
| 4.2 免疫共沉淀技术 | 第25页 |
| 4.3 双分子荧光互补分析技术 | 第25-26页 |
| 4.4 Pull-down技术 | 第26页 |
| 5 CRISPR研究概况 | 第26-29页 |
| 5.1 CRISPR系统组成 | 第26-27页 |
| 5.2 CRISPR/Cas的工作原理 | 第27页 |
| 5.3 CRISPR/Cas9基因敲除原理及其应用 | 第27-29页 |
| 下篇 研究内容 | 第29-67页 |
| 第二章 番茄斑萎病毒病毒颗粒的提取及质谱分析 | 第31-37页 |
| 1 实验材料、试剂及器材 | 第31页 |
| 1.1 植物材料及病毒 | 第31页 |
| 1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 1.3 主要材料及仪器 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.1 TSWV病毒颗粒的提取 | 第31-33页 |
| 2.2 SDS-PAGE胶电泳分析 | 第33-34页 |
| 3 结果分析 | 第34-36页 |
| 3.1 蔗糖梯度离心提取TSWV病毒粒体 | 第34-35页 |
| 3.2 TSWV病毒颗粒SDS-PAGE电泳检测及质谱分析 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 TSWV核衣壳蛋白N与RdRp互作研究 | 第37-51页 |
| 1. 实验材料、试剂及器材 | 第37页 |
| 1.1 载体和菌种 | 第37页 |
| 1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-47页 |
| 2.1 载体构建 | 第37-44页 |
| 2.1.1 PCR扩增体系 | 第37-38页 |
| 2.1.2 PCR产物的凝胶电泳 | 第38-39页 |
| 2.1.3 PCR产物的切胶回收 | 第39-40页 |
| 2.1.4 PCR回收产物和载体的酶切及连接 | 第40-41页 |
| 2.1.5 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第41-42页 |
| 2.1.6 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第42-43页 |
| 2.1.7 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第43页 |
| 2.1.8 测序 | 第43页 |
| 2.1.9 序列分析 | 第43-44页 |
| 2.2 蛋白原核表达 | 第44-45页 |
| 2.3 GST pull-down技术 | 第45-46页 |
| 2.4 Western blot检测蛋白表达水平 | 第46-47页 |
| 3 结果分析 | 第47-50页 |
| 3.1 RdRp片段的载体构建及原核表达 | 第47-49页 |
| 3.2 GST pull-down验证N与RdRp的互作 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 Sar1多克隆抗体的制备及转基因烟草的获取 | 第51-59页 |
| 1 实验材料、试剂及器材 | 第51页 |
| 1.1 植物材料、生物材料及病毒 | 第51页 |
| 1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 1.3 主要材料及仪器 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-54页 |
| 2.1 多克隆抗体制备 | 第51-52页 |
| 2.2 效价测定 | 第52-53页 |
| 2.3 烟草叶盘法转基因技术 | 第53-54页 |
| 3 结果分析 | 第54-58页 |
| 3.1 Sar1多克隆抗体的制备 | 第54-57页 |
| 3.1.1 Sar1原核表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.1.2 Sar1蛋白的原核表达 | 第55-56页 |
| 3.1.3 抗血清的制备与ELISA测定效价 | 第56页 |
| 3.1.4 Western Blot的鉴定结果 | 第56-57页 |
| 3.2 转基因技术研究Sar1对于TSWV病毒侵染的影响 | 第57-58页 |
| 3.2.1 Sar1植物表达载体的构建 | 第57页 |
| 3.2.2 激光共聚焦观察转Sar1基因本氏烟 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 CRISPR-Cas9技术抑制TMV侵染的研究 | 第59-65页 |
| 1 实验材料、试剂及器材 | 第59页 |
| 1.1 植物材料及病毒 | 第59页 |
| 1.2 主要材料及仪器 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-60页 |
| 2.1 农杆菌感受态细胞转化 | 第59-60页 |
| 2.2 农杆菌浸润本氏烟 | 第60页 |
| 3 结果及分析 | 第60-62页 |
| 3.1 PCR扩增,用于TMV基因组的测序 | 第60页 |
| 3.2 TMV-GFP系统侵染观察 | 第60-61页 |
| 3.3 构建CRISPR/Cas9载体,准备攻击TMV基因组 | 第61页 |
| 3.4 浸润农杆菌,进行观察 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| 第六章 全文总结 | 第65-67页 |
| 一、全文结论 | 第65页 |
| 二、创新点及展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录A 本研究所用引物 | 第71-73页 |
| 附录B 本论文主要的重要缩写词及中文对照 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
