| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 前言 | 第12-30页 |
| 1 Nur77 | 第12-19页 |
| 1.1 Nur77的结构 | 第12-13页 |
| 1.2 Nur77的调控方式 | 第13-14页 |
| 1.3 Nur77的磷酸化调控 | 第14-15页 |
| 1.4 Nur77与代谢 | 第15-17页 |
| 1.4.1 Nur77与骨骼肌代谢 | 第15页 |
| 1.4.2 Nur77与肝脏代谢 | 第15-16页 |
| 1.4.3 Nur77与脂肪组织代谢 | 第16-17页 |
| 1.5 Nur77与肿瘤转移 | 第17页 |
| 1.6 Nur77调控细胞增殖与细胞凋亡 | 第17-19页 |
| 2 脂肪酸氧化 | 第19-29页 |
| 2.1 脂肪酸氧化的发现 | 第19页 |
| 2.2 三功能蛋白 | 第19-21页 |
| 2.3 硫解酶 | 第21-23页 |
| 2.4 脂肪酸氧化的调控 | 第23-24页 |
| 2.4.1 脂肪酸氧化的转录调控 | 第23页 |
| 2.4.2 脂肪酸氧化的转录后调控 | 第23-24页 |
| 2.5 脂肪酸氧化与NADPH | 第24-26页 |
| 2.6 脂肪酸氧化与肿瘤代谢 | 第26-27页 |
| 2.7 脂肪酸氧化与黑色素瘤转移 | 第27-29页 |
| 3 研究目的、思路及意义 | 第29-30页 |
| 材料与方法 | 第30-51页 |
| 1 实验材料 | 第30-34页 |
| 1.1 抗体和试剂 | 第30-32页 |
| 1.2 主要仪器 | 第32-33页 |
| 1.3 细胞株 | 第33页 |
| 1.4 实验小鼠 | 第33页 |
| 1.5 质粒载体及菌株 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-51页 |
| 2.1 分子克隆 | 第34-38页 |
| 2.1.1 大肠杆菌感受态制备 | 第34页 |
| 2.1.2 质粒转化 | 第34-35页 |
| 2.1.3 质粒提取 | 第35页 |
| 2.1.4 表达质粒构建 | 第35-38页 |
| 2.2 细胞实验 | 第38-39页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 2.2.2 细胞转染 | 第38-39页 |
| 2.2.3 慢病毒感染 | 第39页 |
| 2.3 蛋白提取及Western Blot | 第39-41页 |
| 2.4 体外蛋白提取 | 第41-42页 |
| 2.5 免疫共沉淀 | 第42页 |
| 2.6 细胞无糖存活实验 | 第42页 |
| 2.7 悬浮细胞实验 | 第42-43页 |
| 2.8 免疫荧光 | 第43-44页 |
| 2.9 蛋白氧化 | 第44页 |
| 2.10 脂肪酸氧化检测 | 第44-45页 |
| 2.11 酶活性检测 | 第45-46页 |
| 2.11.1 真核细胞中检测酶活性 | 第45-46页 |
| 2.11.2 原核细胞中检测酶活性 | 第46页 |
| 2.12 代谢产物检测 | 第46-49页 |
| 2.12.1 ROS检测 | 第46-47页 |
| 2.12.2 NADP~+/NADPH检测 | 第47页 |
| 2.12.3 GSSG/GSH检测 | 第47-48页 |
| 2.12.4 ATP水平检测 | 第48-49页 |
| 2.13 小鼠实验 | 第49-51页 |
| 2.13.1 循环肿瘤细胞存活模型 | 第49-50页 |
| 2.13.2 肺转移模型 | 第50-51页 |
| 实验结果 | 第51-76页 |
| 1 Nur77通过与TPβ结合促进无糖条件下细胞存活 | 第51-61页 |
| 1.1 无糖促使Nur77与TPβ结合增强 | 第51-56页 |
| 1.2 TPβ与Nur77在同一信号通路调控ROS水平 | 第56-61页 |
| 2 无糖促使TPβ被氧化并影响酶活性 | 第61-66页 |
| 2.1 ROS抑制TPβ酶活性 | 第61-63页 |
| 2.2 Cys458是TPβ的关键酶活性位点 | 第63-66页 |
| 3 Nur77通过抑制TPβ氧化提高脂肪酸氧化 | 第66-71页 |
| 3.1 Nur77可以增强TPβ的酶活性 | 第66-69页 |
| 3.2 Nur77与TPβ影响细胞脂肪酸氧化 | 第69-71页 |
| 4 Nur77和TPβ对循环肿瘤细胞的存活和转移至关重要 | 第71-76页 |
| 4.1 悬浮细胞模型中TPβ与Nur77对细胞存活的影响 | 第71-72页 |
| 4.2 小鼠模型中TPβ与Nur77对细胞生存和转移的影响 | 第72-76页 |
| 4.2.1 TPβ或Nur77敲低使循环肿瘤细胞生存率下降 | 第72-73页 |
| 4.2.2 TPβ或Nur77敲低影响肿瘤细胞转移能力 | 第73-76页 |
| 讨论与展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
