| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 术语与缩略语表 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.1 三嗪类除草剂的微生物降解研究进展 | 第14-19页 |
| 1.1.1 三嗪类除草剂概述 | 第14页 |
| 1.1.2 降解三嗪类除草剂的微生物菌株 | 第14-15页 |
| 1.1.3 三嗪类除草剂微生物降解主要途径与基因 | 第15-19页 |
| 1.2 扑草津的微生物降解 | 第19-22页 |
| 1.2.1 扑草净概述 | 第19-20页 |
| 1.2.2 扑草净的残留危害 | 第20-21页 |
| 1.2.3 扑草净的微生物降解 | 第21-22页 |
| 第二章 引言 | 第22-23页 |
| 2.1 研究背景与意义 | 第22-23页 |
| 第三章 材料与方法 | 第23-35页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第23-25页 |
| 3.1.1 药品与试剂 | 第23页 |
| 3.1.2 供试菌株 | 第23-24页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第24页 |
| 3.1.4 培养基与试剂配方 | 第24-25页 |
| 3.1.5 实验所用引物 | 第25页 |
| 3.2 菌株JW-1的质粒基因序列分析 | 第25-28页 |
| 3.2.1 菌株的质粒提取 | 第25-26页 |
| 3.2.2 样品检测与测序 | 第26-28页 |
| 3.3 脱甲硫基酶克隆载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.3.1 目的基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| 3.3.2 克隆反应与阳性克隆检测 | 第29页 |
| 3.4 脱甲硫基表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.4.1 trzN的PCR扩增 | 第29页 |
| 3.4.2 PCR产物和pET-28b+质粒的双酶切、产物纯化和酶连 | 第29-30页 |
| 3.4.3 酶连产物转化和阳性克隆转化子的筛选 | 第30页 |
| 3.5 脱甲基酶的功能验证 | 第30-31页 |
| 3.5.1 表达菌株的诱导 | 第30-31页 |
| 3.5.2 降解功能验证 | 第31页 |
| 3.6 最佳诱导条件筛选 | 第31-32页 |
| 3.6.1 诱导条件的设计 | 第31页 |
| 3.6.2 粗酶样品的制备 | 第31页 |
| 3.6.3 粗酶蛋白含量测定 | 第31-32页 |
| 3.6.4 粗酶活性测定 | 第32页 |
| 3.7 目标蛋白TrzN的GraviTrap亲和层析纯化 | 第32-33页 |
| 3.7.1 粗酶样品制备 | 第32页 |
| 3.7.2 目的蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 3.7.3 蛋白脱盐 | 第33页 |
| 3.8 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第33页 |
| 3.8.1 样品处理 | 第33页 |
| 3.8.2 SDS-PAGE凝胶的制备 | 第33页 |
| 3.8.3 蛋白凝胶电泳 | 第33页 |
| 3.8.4 蛋白凝胶染色与脱色 | 第33页 |
| 3.9 酶的功能鉴定 | 第33页 |
| 3.10 酶学性质研究 | 第33-34页 |
| 3.10.1 重组酶TrzN最适反应温度和温度稳定性试验 | 第33-34页 |
| 3.10.2 重组酶TrzN最适pH和pH稳定性试验 | 第34页 |
| 3.10.3 酶动力学常数测定 | 第34页 |
| 3.11 重组酶TrzN降解底物谱测定 | 第34-35页 |
| 3.11.1 底物谱测定实验方法 | 第34页 |
| 3.11.2 仪器检测方法 | 第34-35页 |
| 第四章 结果与分析 | 第35-48页 |
| 4.1 菌JW-1的质粒测序和脱甲硫基基因预测 | 第35-38页 |
| 4.1.1 质粒样品检测 | 第35页 |
| 4.1.2 质粒样品建库测序 | 第35-36页 |
| 4.1.3 数据组装 | 第36-38页 |
| 4.1.4 脱甲硫基的查找级生物学信息学预测 | 第38页 |
| 4.2 trzN基因克隆载体的构建 | 第38页 |
| 4.3 trzN基因表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 4.3.1 PCR产物和pET-28b+的双酶切、产物纯化 | 第38-39页 |
| 4.3.2 酶切产物酶连、转化 | 第39-40页 |
| 4.4 脱甲硫基基因功能验证 | 第40-42页 |
| 4.4.1 扑草净降解产物2-羟基扑灭津标准曲线绘制 | 第40页 |
| 4.4.2 酶学功能验证 | 第40-42页 |
| 4.5 最佳诱导条件筛选结果 | 第42页 |
| 4.6 降解酶的分离与纯化 | 第42-43页 |
| 4.7 重组酶TrzN酶学特性研究 | 第43-46页 |
| 4.7.1 酶TrzN最适反应温度测定 | 第43-44页 |
| 4.7.2 酶TrzN最适反应pH测定 | 第44-45页 |
| 4.7.3 酶TrzN反应动力学常数 | 第45-46页 |
| 4.8 重组酶TrzN底物特异性 | 第46-48页 |
| 第五章 讨论 | 第48-50页 |
| 5.1 扑草净脱甲硫基基因trzN的克隆与表达 | 第48页 |
| 5.2 温度对重组酶TrzN活性质的影响 | 第48页 |
| 5.3 pH对重组酶TrzN酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 5.4 重组酶TrzN的酶动力学研究 | 第49页 |
| 5.5 重组酶TrzN酶降解底物谱研究 | 第49-50页 |
| 第六章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录1 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
