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镉诱导文蛤鳃细胞凋亡检测及金属硫蛋白的作用机制

摘要第3-4页
ABSTRACT第4-5页
1 引言第8-19页
    1.1 镉在水生动物体内的富集及毒害作用第8-10页
        1.1.1 镉的来源及对动物的毒害作用第8-9页
        1.1.2 镉在水生生物体内的富集第9-10页
    2.1 镉对水生生物氧化应激相关酶活的影响第10-12页
        2.1.1 镉对水生动物抗氧化酶活性的影响第10-11页
        2.1.2 镉对水生动物线粒体标志酶的影响第11-12页
        2.1.3 镉对水生动物ATP酶活性的影响第12页
    3.1 镉诱导水生动物氧化损伤和细胞凋亡第12-14页
        3.1.1 细胞凋亡形态学检测第12-13页
        3.1.2 细胞凋亡生化指标研究第13-14页
    4.1 镉诱导细胞氧化损伤和凋亡的机制分析第14-17页
        4.1.1 镉与金属硫蛋白第14-15页
        4.1.2 MT在细胞凋亡通路中的作用第15-17页
            4.1.2.1 氧化应激通路第15-16页
            4.1.2.2 线粒体介导的细胞凋亡通路第16-17页
            4.1.2.3 外源性凋亡通路第17页
    5.1 本论文的研究目的、意义第17-19页
2 镉对文蛤鳃氧化损伤及凋亡形态学检测第19-29页
    1.1 实验方法第19-22页
        1.1.1 实验材料第19-20页
        1.1.2 实验方法第20-22页
            1.1.2.1 石蜡切片第20-21页
            1.1.2.2 超微切片第21页
            1.1.2.3 AO/EB双荧光检测第21-22页
    2.1 实验结果第22-27页
        2.1.1 镉对文蛤鳃组织结构的影响第22-25页
            2.1.1.1 文蛤鳃组织横切面观察第22-24页
            2.1.1.2 文蛤鳃组织纵切面观察第24-25页
        2.1.2 镉对文蛤鳃超微结构分析第25-26页
        2.1.3 荧光显微镜观察镉诱导文蛤鳃细胞凋亡第26-27页
    3.1 讨论第27-29页
3 镉对文蛤鳃氧化应激相关指标的影响第29-38页
    1.1 材料与方法第29-32页
        1.1.1 实验材料第29-30页
        1.1.2 实验方法第30-31页
            1.1.2.1 蛋白质羰基(PCO)含量检测第30页
            1.1.2.2 DNA-蛋白质交联率(DPC)的检测第30-31页
            1.1.2.3 DNA片段检测第31页
        1.1.3 数据处理第31-32页
    2.1 实验结果第32-36页
        2.1.1 镉对文蛤鳃ROS含量的影响第32页
        2.1.2 镉对文蛤鳃PCO含量的影响第32-33页
        2.1.3 镉对文蛤鳃DPC系数的影响第33-34页
        2.1.4 镉对文蛤鳃Caspase-3,8,9活性的影响第34-35页
        2.1.5 琼脂糖凝胶电泳检验镉对文蛤鳃细胞DNA完整性的影响第35-36页
    3.1 讨论第36-38页
4 镉对文蛤鳃氧化应激酶活的影响第38-45页
    1.1 材料与方法第38-40页
        1.1.1 实验材料第38-39页
        1.1.2 实验方法第39-40页
            1.1.2.1 氧化应激酶活的测定第39页
            1.1.2.2 Na~+-K~+、Ca~(2+)-Mg~(2+)、总ATP酶活性测定第39-40页
        1.1.3 数据处理第40页
    2.1 结果第40-43页
        2.1.1 镉对文蛤鳃氧化应激酶活力的影响第40-43页
            2.1.1.1 镉对文蛤鳃SOD活力的影响第40页
            2.1.1.2 镉对文蛤鳃CAT活力的影响第40-41页
            2.1.1.3 镉对文蛤鳃GPx活力的影响第41-42页
            2.1.1.4 镉对文蛤鳃ATPase的影响第42-43页
    3.1 讨论第43-45页
5 镉诱导金属硫蛋白在鳃中的表达及其作用特点第45-52页
    1.1 材料与方法第45-47页
        1.1.1 实验材料第45-46页
        1.1.2 实验方法第46-47页
            1.1.2.1 文蛤鳃T-RNA的提取第46页
            1.1.2.2 文蛤鳃T-cDNA制备第46-47页
            1.1.2.3 文蛤鳃MT mRNA表达第47页
        1.1.3 数据处理第47页
    2.1 结果第47-50页
        2.1.1 文蛤鳃总RNA制备第47-48页
        2.1.2 文蛤鳃MT特异性扩增第48-49页
        2.1.3 镉对文蛤鳃MT mRNA相对转录水平的影响第49页
        2.1.4 镉对文蛤鳃细胞MT mRNA表达量与各指标间的相关性分析第49-50页
    3.1 讨论第50-52页
总结与展望第52-53页
    1 结论第52页
    2 展望第52-53页
参考文献第53-65页
致谢第65-66页
攻读学位期间发表的学术论文目录第66页

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