| 摘要 | 第8-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-40页 |
| 1 大豆花叶病毒概述 | 第16-23页 |
| 1.1 大豆花叶病毒的分子特征 | 第16-17页 |
| 1.2 大豆花叶病毒的症状与危害 | 第17-19页 |
| 1.3 株系划分及流行 | 第19-20页 |
| 1.4 大豆花叶病毒的抗性遗传及抗病基因定位研究 | 第20-22页 |
| 1.5 病毒的侵染和运输 | 第22-23页 |
| 2 酵母双杂交技术概述 | 第23-26页 |
| 2.1 酵母双杂交简介 | 第23-24页 |
| 2.2 膜蛋白的Y2H | 第24-26页 |
| 3 病毒诱导基因沉默 | 第26-30页 |
| 3.1 VIGS的产生和发展 | 第26-27页 |
| 3.2 VIGS的优缺点 | 第27-28页 |
| 3.3 影响VIGS载体的应用的因素 | 第28-29页 |
| 3.4 大豆中病毒沉默载体的研究 | 第29-30页 |
| 4 延伸因子研究进展 | 第30-33页 |
| 4.1 翻译延伸功能 | 第30-31页 |
| 4.2 eEF1a与tRNA外排的关系 | 第31页 |
| 4.3 蛋白降解功能 | 第31-32页 |
| 4.4 细胞凋亡 | 第32页 |
| 4.5 与病毒繁殖的关系 | 第32-33页 |
| 5 内质网应激反应概述 | 第33-37页 |
| 5.1 引起内质网应激反应的因素 | 第34-35页 |
| 5.2 内质网应激途径研究 | 第35-36页 |
| 5.3 UPR介导的细胞程序性死亡 | 第36-37页 |
| 6 研究目的和意义 | 第37-40页 |
| 第二章 SMV侵染后大豆酵母双杂交文库的构建及质量鉴定 | 第40-56页 |
| 1 试验材料 | 第40-41页 |
| 2 试验方法 | 第41-49页 |
| 2.1 植物材料的准备 | 第41-42页 |
| 2.2 大豆总RNA的提取 | 第42页 |
| 2.3 mRNA的分离 | 第42-43页 |
| 2.4 cDNA文库(Uncut型)的构建 | 第43-46页 |
| 2.5 cDNA文库(Uncut型)文库质量鉴定 | 第46页 |
| 2.6 捕获载体pPR3-N-R1R2的构建 | 第46-48页 |
| 2.7 酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第48-49页 |
| 2.8 酵母双杂交cDNA文库质量鉴定 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-54页 |
| 3.1 大豆总RNA的检测 | 第49-50页 |
| 3.2 mRNA的检测 | 第50页 |
| 3.3 Uncut文库质量鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4 Prey vector pPR3-N-R1R2构建结果鉴定 | 第51-53页 |
| 3.5 酵母双杂文库质量鉴定 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 与SMV-P3蛋白互作的寄主蛋白筛选及研究 | 第56-76页 |
| 1 试验材料 | 第56-57页 |
| 1.1 植物材料 | 第56-57页 |
| 1.2 菌株及载体 | 第57页 |
| 2 试验方法 | 第57-65页 |
| 2.1 诱饵蛋白的性质分析及诱饵载体的构建 | 第57-61页 |
| 2.2 载体自激活检测 | 第61页 |
| 2.3 酵母双杂交文库转化及互作子的筛选 | 第61-62页 |
| 2.4 阳性互作子的获取及生物信息学分析 | 第62-63页 |
| 2.5 阳性互作子与P3共转化验证互作 | 第63页 |
| 2.6 双分子荧光互补分析 | 第63-64页 |
| 2.7 免疫共沉淀分析 | 第64-65页 |
| 2.8 候选基因组织表达及对SMV响应分析 | 第65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-73页 |
| 3.1 诱饵蛋白P3的载体构建 | 第65-66页 |
| 3.2 P3蛋白性质分析 | 第66-67页 |
| 3.3 酵母双杂交文库筛选与互作子的分类 | 第67-69页 |
| 3.4 P3与寄主候选蛋白GmEF1a和GmVATPase的互作研究 | 第69-72页 |
| 3.5 候选基因组织表达及对SMV响应分析 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-76页 |
| 第四章 翻译延伸因子的功能分析 | 第76-112页 |
| 1 翻译延伸因子亚细胞定位及与P3共定位研究 | 第76-81页 |
| 1.1 试验材料 | 第76页 |
| 1.2 试验方法 | 第76-78页 |
| 1.3 结果与分析 | 第78-81页 |
| 2 延伸因子与RdRp的相互作用 | 第81-83页 |
| 2.1 试验材料 | 第81页 |
| 2.2 试验方法 | 第81页 |
| 2.3 结果与分析 | 第81-83页 |
| 3 VIGS载体的构建及验证 | 第83-88页 |
| 3.1 试验材料 | 第83页 |
| 3.2 试验方法 | 第83-85页 |
| 3.3 结果与分析 | 第85-88页 |
| 4 大豆沉默材料株对不同病原物的应答反应 | 第88-100页 |
| 4.1 试验材料 | 第88-89页 |
| 4.2 试验方法 | 第89-91页 |
| 4.3 结果与分析 | 第91-100页 |
| 5 拟南芥中GmEF1a同源突变体的功能验证 | 第100-105页 |
| 5.1 试验材料 | 第100页 |
| 5.2 试验方法 | 第100-102页 |
| 5.3 结果与分析 | 第102-105页 |
| 6 GmEF1a参与SMV在内质网的复制 | 第105-110页 |
| 6.1 试验材料 | 第105页 |
| 6.2 试验方法 | 第105-106页 |
| 6.3 结果与分析 | 第106-110页 |
| 7 讨论 | 第110-112页 |
| 第五章 与P3互作的Vacuolar-ATPase的功能鉴定 | 第112-126页 |
| 1 Vacuolar-ATPase的组织表达及亚细胞定位 | 第112-114页 |
| 1.1 试验材料 | 第112页 |
| 1.2 试验方法 | 第112页 |
| 1.3 结果及分析 | 第112-114页 |
| 2 VATPase的沉默载体构建及沉默植株的获得 | 第114页 |
| 2.1 试验材料 | 第114页 |
| 2.2 试验方法 | 第114页 |
| 2.3 结果及分析 | 第114页 |
| 3 VATPase沉默植株对SMV的抗性反应 | 第114-116页 |
| 3.1 试验材料 | 第114页 |
| 3.2 试验方法 | 第114-115页 |
| 3.3 结果及分析 | 第115-116页 |
| 4 VATPase与水杨酸SA途径的关系 | 第116-117页 |
| 4.1 试验材料 | 第116页 |
| 4.2 试验方法 | 第116页 |
| 4.3 结果及分析 | 第116-117页 |
| 5 VATPase沉默植株的RNA测序及后续分析 | 第117-124页 |
| 5.1 试验材料 | 第117页 |
| 5.2 试验方法 | 第117-118页 |
| 5.3 结果及分析 | 第118-124页 |
| 6 讨论 | 第124-126页 |
| 全文结论及创新点 | 第126-130页 |
| 参考文献 | 第130-152页 |
| 附录 | 第152-166页 |
| 致谢 | 第166页 |
