| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 英文缩写符号 | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-13页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 醛酮还原酶AKR | 第9-11页 |
| 1.2.1 醛酮还原酶AKR的结构和基本分类 | 第9-10页 |
| 1.2.2 醛酮还原酶AKR的结构和功能 | 第10页 |
| 1.2.3 醛酮还原酶AKR族与疾病 | 第10-11页 |
| 1.3 课题研究的目的与意义 | 第11-13页 |
| 第二章 AKR7A3的原核表达、条件优化及活性研究 | 第13-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第13-16页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第13页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第13-14页 |
| 2.1.3 实验试剂配制 | 第14-16页 |
| 2.2 实验内容 | 第16-22页 |
| 2.2.1 AKR7A3-pET-15b表达菌的构建 | 第16-17页 |
| 2.2.2 AKR7A3原核表达 | 第17-20页 |
| 2.2.3 AKR7A3表达条件优化 | 第20页 |
| 2.2.4 醛酮还原酶AKR7A3酶活性检测 | 第20-22页 |
| 2.3 实验结果 | 第22-28页 |
| 2.3.1 BL21-pET15b-AKR7A3表达菌构建结果 | 第22-23页 |
| 2.3.2 AKR7A3蛋白表达结果 | 第23页 |
| 2.3.3 AKR7A3表达条件优化 | 第23-25页 |
| 2.3.4 醛酮还原酶AKR7A3酶活性检测结果 | 第25-28页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第28-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 两种细胞中AKR7A3在蛋白水平的鉴定 | 第30-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 3.1.1 实验细胞及菌株 | 第30页 |
| 3.1.2 实验用动物 | 第30-31页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第31页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.5 实验试剂配置 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-41页 |
| 3.2.1 肝细胞及肝癌细胞的培养 | 第33-35页 |
| 3.2.2 AKR7A3鼠多克隆抗体的制备 | 第35-39页 |
| 3.2.3 BCA法定量检测细胞中总蛋白含量 | 第39-41页 |
| 3.2.4 ELISA间接法测细胞中AKR7A3蛋白含量 | 第41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-46页 |
| 3.3.1 肝细胞及肝癌细胞培养结果 | 第41-42页 |
| 3.3.2 鼠多克隆抗体制备结果 | 第42-44页 |
| 3.3.3 BCA法检测两种细胞蛋白表达量 | 第44-45页 |
| 3.3.4 ELISA间接法测两种细胞中AKR7A3表达含量 | 第45-46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46页 |
| 3.5 小结 | 第46-47页 |
| 第四章 两种细胞中AKR7A3在mRNA水平的鉴定 | 第47-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-50页 |
| 4.1.1 实验细胞 | 第48页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第49-50页 |
| 4.2 试剂配置 | 第50-51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-58页 |
| 4.3.1 肝细胞及肝癌细胞的培养 | 第51-53页 |
| 4.3.2 两种细胞总RNA的提取与鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.3 cDNA的合成与鉴定 | 第54-57页 |
| 4.3.4 实时荧光定量PCR | 第57-58页 |
| 4.4 实验结果 | 第58-61页 |
| 4.4.1 细胞培养结果 | 第58页 |
| 4.4.2 总RNA提取与鉴定结果 | 第58-59页 |
| 4.4.3 引物特异性验证结果 | 第59页 |
| 4.4.4 实时荧光定量PCR结果 | 第59-61页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第61页 |
| 4.6 小结 | 第61-62页 |
| 总结与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
