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醛酮还原酶AKR7A3在肝细胞中的表达及性质研究

摘要第3-4页
ABSTRACT第4页
英文缩写符号第8-9页
第一章 绪论第9-13页
    1.1 引言第9页
    1.2 醛酮还原酶AKR第9-11页
        1.2.1 醛酮还原酶AKR的结构和基本分类第9-10页
        1.2.2 醛酮还原酶AKR的结构和功能第10页
        1.2.3 醛酮还原酶AKR族与疾病第10-11页
    1.3 课题研究的目的与意义第11-13页
第二章 AKR7A3的原核表达、条件优化及活性研究第13-30页
    2.1 实验材料第13-16页
        2.1.1 实验试剂第13页
        2.1.2 实验仪器第13-14页
        2.1.3 实验试剂配制第14-16页
    2.2 实验内容第16-22页
        2.2.1 AKR7A3-pET-15b表达菌的构建第16-17页
        2.2.2 AKR7A3原核表达第17-20页
        2.2.3 AKR7A3表达条件优化第20页
        2.2.4 醛酮还原酶AKR7A3酶活性检测第20-22页
    2.3 实验结果第22-28页
        2.3.1 BL21-pET15b-AKR7A3表达菌构建结果第22-23页
        2.3.2 AKR7A3蛋白表达结果第23页
        2.3.3 AKR7A3表达条件优化第23-25页
        2.3.4 醛酮还原酶AKR7A3酶活性检测结果第25-28页
    2.4 结果与讨论第28-29页
    2.5 小结第29-30页
第三章 两种细胞中AKR7A3在蛋白水平的鉴定第30-47页
    3.1 实验材料第30-33页
        3.1.1 实验细胞及菌株第30页
        3.1.2 实验用动物第30-31页
        3.1.3 实验试剂第31页
        3.1.4 实验仪器第31-32页
        3.1.5 实验试剂配置第32-33页
    3.2 实验方法第33-41页
        3.2.1 肝细胞及肝癌细胞的培养第33-35页
        3.2.2 AKR7A3鼠多克隆抗体的制备第35-39页
        3.2.3 BCA法定量检测细胞中总蛋白含量第39-41页
        3.2.4 ELISA间接法测细胞中AKR7A3蛋白含量第41页
    3.3 实验结果第41-46页
        3.3.1 肝细胞及肝癌细胞培养结果第41-42页
        3.3.2 鼠多克隆抗体制备结果第42-44页
        3.3.3 BCA法检测两种细胞蛋白表达量第44-45页
        3.3.4 ELISA间接法测两种细胞中AKR7A3表达含量第45-46页
    3.4 结果与讨论第46页
    3.5 小结第46-47页
第四章 两种细胞中AKR7A3在mRNA水平的鉴定第47-62页
    4.1 实验材料第48-50页
        4.1.1 实验细胞第48页
        4.1.2 主要试剂第48-49页
        4.1.3 主要仪器第49-50页
    4.2 试剂配置第50-51页
    4.3 实验方法第51-58页
        4.3.1 肝细胞及肝癌细胞的培养第51-53页
        4.3.2 两种细胞总RNA的提取与鉴定第53-54页
        4.3.3 cDNA的合成与鉴定第54-57页
        4.3.4 实时荧光定量PCR第57-58页
    4.4 实验结果第58-61页
        4.4.1 细胞培养结果第58页
        4.4.2 总RNA提取与鉴定结果第58-59页
        4.4.3 引物特异性验证结果第59页
        4.4.4 实时荧光定量PCR结果第59-61页
    4.5 结果与讨论第61页
    4.6 小结第61-62页
总结与展望第62-64页
参考文献第64-67页
致谢第67页

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