| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词与译名 | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-35页 |
| 1.1 甘露聚糖及其降解酶 | 第13-16页 |
| 1.1.1 线性甘露聚糖 | 第13-14页 |
| 1.1.2 葡甘露聚糖 | 第14页 |
| 1.1.3 半乳甘露聚糖 | 第14页 |
| 1.1.4 半乳葡甘露聚糖 | 第14-15页 |
| 1.1.5 甘露聚糖降解酶系 | 第15-16页 |
| 1.2 β-甘露聚糖酶研究进展 | 第16-28页 |
| 1.2.1 来源 | 第16页 |
| 1.2.2 分类及结构 | 第16-19页 |
| 1.2.3 β-甘露聚糖酶的克隆表达 | 第19-22页 |
| 1.2.4 β-甘露聚糖酶的酶学特性 | 第22-23页 |
| 1.2.5 β-甘露聚糖酶的水解特性 | 第23-24页 |
| 1.2.6 β-甘露聚糖酶的分子改造 | 第24-28页 |
| 1.3 甘露寡糖及部分水解甘露聚糖研究进展 | 第28-32页 |
| 1.3.1 甘露寡糖 | 第28页 |
| 1.3.2 部分水解甘露聚糖 | 第28-29页 |
| 1.3.3 制备方法及组成 | 第29-32页 |
| 1.4 本课题的研究目的及意义 | 第32-33页 |
| 1.5 主要研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 米黑根毛霉β-甘露聚糖酶的高效表达及应用 | 第35-55页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 材料与方法 | 第35-42页 |
| 2.2.1 主要仪器和材料 | 第35-36页 |
| 2.2.2 菌株和培养基 | 第36-37页 |
| 2.2.3 β-甘露聚糖酶基因(RmMan5A)的克隆及表达载体构建 | 第37页 |
| 2.2.4 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的异源表达及转化子筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.5 高密度发酵产β-甘露聚糖酶(RmMan5A) | 第38-39页 |
| 2.2.6 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的纯化 | 第39页 |
| 2.2.7 β-甘露聚糖酶酶活力和蛋白浓度的测定 | 第39页 |
| 2.2.8 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的酶学性质 | 第39-40页 |
| 2.2.9 瓜尔胶的水解及PHGG的分级沉淀 | 第40-41页 |
| 2.2.10 瓜尔胶及PHGG理化性质的测定 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第42-53页 |
| 2.3.1 高拷贝转化子筛选及转化子鉴定 | 第42页 |
| 2.3.2 高密度发酵产β-甘露聚糖酶(RmMan5A) | 第42-43页 |
| 2.3.3 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的纯化 | 第43-44页 |
| 2.3.4 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的酶学性质 | 第44-45页 |
| 2.3.5 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的底物特异性和水解特性 | 第45-46页 |
| 2.3.6 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)水解瓜尔胶制备PHGG | 第46-47页 |
| 2.3.7 瓜尔胶和PHGG的分子量分布 | 第47页 |
| 2.3.8 PHGG的乙醇沉淀分级 | 第47-49页 |
| 2.3.9 瓜尔胶和PHGG的傅里叶变换近红外光谱(FT-IR)分析 | 第49-51页 |
| 2.3.10 PHGG的核磁共振(NMR)分析 | 第51-53页 |
| 2.4 本章小结 | 第53-55页 |
| 第三章 米黑根毛霉β-甘露聚糖酶的定向进化、高效表达及应用 | 第55-81页 |
| 3.1 引言 | 第55页 |
| 3.2 材料与方法 | 第55-63页 |
| 3.2.1 主要仪器和材料 | 第55-56页 |
| 3.2.2 菌株和培养基 | 第56页 |
| 3.2.3 β-甘露聚糖酶基因(RmMan5A)随机突变体文库的构建 | 第56-58页 |
| 3.2.4 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)突变体文库的高通量筛选 | 第58-59页 |
| 3.2.5 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的定点突变 | 第59页 |
| 3.2.6 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的饱和突变 | 第59页 |
| 3.2.7 β-甘露聚糖酶在大肠杆菌中表达与纯化 | 第59-60页 |
| 3.2.8 β-甘露聚糖酶酶活力和蛋白浓度的测定 | 第60页 |
| 3.2.9 β-甘露聚糖酶突变体(mRmMan5A)的酶学性质 | 第60-61页 |
| 3.2.10 β-甘露聚糖酶突变体(mRmMan5A)的水解特性 | 第61页 |
| 3.2.11 β-甘露聚糖酶突变体(mRmMan5A)在毕赤酵母中表达 | 第61页 |
| 3.2.12 高密度发酵产β-甘露聚糖酶突变体(mRmMan5A) | 第61-62页 |
| 3.2.13 蒸汽爆破处理棕榈粕 | 第62页 |
| 3.2.14 酶解棕榈粕制备甘露寡糖 | 第62页 |
| 3.2.15 高效液相色谱(HPLC)分析 | 第62页 |
| 3.2.16 扫描电镜(SEM)分析 | 第62页 |
| 3.2.17 甘露寡糖的公斤级生产 | 第62-63页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第63-79页 |
| 3.3.1 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)随机突变体文库的构建 | 第63页 |
| 3.3.2 突变体表达文库的高通量筛选 | 第63-64页 |
| 3.3.3 β-甘露聚糖酶的序列分析 | 第64页 |
| 3.3.4 β-甘露聚糖酶突变体(mRmMan5A)的表达纯化 | 第64-65页 |
| 3.3.5 β-甘露聚糖酶突变体(mRmMan5A)的酶学性质 | 第65-68页 |
| 3.3.6 β-甘露聚糖酶突变体(mRmMan5A)的水解特性 | 第68-70页 |
| 3.3.7 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的定点突变 | 第70页 |
| 3.3.8 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的结构分析 | 第70-72页 |
| 3.3.9 β-甘露聚糖酶(RmMan5A)的饱和突变 | 第72-73页 |
| 3.3.10 高密度发酵产β-甘露聚糖酶突变体(mRmMan5A) | 第73-75页 |
| 3.3.11 蒸汽爆破预处理条件优化 | 第75-78页 |
| 3.3.12 甘露寡糖的公斤级生产 | 第78-79页 |
| 3.4 本章小结 | 第79-81页 |
| 第四章 微孢根霉β-甘露聚糖酶的分子改造、高效表达及应用 | 第81-101页 |
| 4.1 引言 | 第81页 |
| 4.2 材料与方法 | 第81-86页 |
| 4.2.1 主要仪器和材料 | 第81-82页 |
| 4.2.2 菌株和培养基 | 第82页 |
| 4.2.3 β-甘露聚糖酶(RmMan134A)氨基酸序列分析 | 第82页 |
| 4.2.4 β-甘露聚糖酶(RmMan134A)的定点突变 | 第82-83页 |
| 4.2.5 β-甘露聚糖酶在大肠杆菌中表达与纯化 | 第83页 |
| 4.2.6 β-甘露聚糖酶酶活力和蛋白浓度的测定 | 第83-84页 |
| 4.2.7 β-甘露聚糖酶的酶学性质 | 第84页 |
| 4.2.8 β-甘露聚糖酶突变体(RmMan134AM36)在毕赤酵母中表达 | 第84-85页 |
| 4.2.9 高密度发酵产β-甘露聚糖酶突变体(RmMan134AM36) | 第85页 |
| 4.2.10 决明子胶的水解 | 第85页 |
| 4.2.11 决明子甘露寡糖的分离纯化 | 第85页 |
| 4.2.12 决明子甘露寡糖理化性质的测定 | 第85-86页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第86-100页 |
| 4.3.1 β-甘露聚糖酶(RmMan134A)氨基酸序列分析 | 第86-88页 |
| 4.3.2 β-甘露聚糖酶突变体的表达纯化 | 第88页 |
| 4.3.3 β-甘露聚糖酶突变体的酶学性质 | 第88-89页 |
| 4.3.4 β-甘露聚糖酶(RmMan134A)的结构分析 | 第89-92页 |
| 4.3.5 高密度发酵产β-甘露聚糖酶突变体(RmMan134AM36) | 第92-93页 |
| 4.3.6 水解决明子胶制备甘露寡糖 | 第93-94页 |
| 4.3.7 决明子甘露寡糖的分离纯化 | 第94-96页 |
| 4.3.8 决明子甘露寡糖的核磁共振(NMR)分析 | 第96-99页 |
| 4.3.9 决明子甘露寡糖制备过程中各组分的含量 | 第99-100页 |
| 4.4 本章小结 | 第100-101页 |
| 第五章 结论与建议 | 第101-103页 |
| 5.1 结论 | 第101-102页 |
| 5.2 本论文主要创新点 | 第102页 |
| 5.3 建议 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-119页 |
| 致谢 | 第119-121页 |
| 个人简历 | 第121-122页 |
