| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 第一节 MSTN(MYOSTATIN)基因的研究进展 | 第14-18页 |
| 1 MSTN的发现 | 第14页 |
| 2 MSTN基因结构与特征 | 第14页 |
| 3 MSTN结构与功能 | 第14-16页 |
| 4 MSTN基因的研究意义 | 第16页 |
| 5 MSTN的应用前景 | 第16-18页 |
| 第二节 CRISPR/Cas9基因编辑系统 | 第18-22页 |
| 1 CRISPR的研究历史 | 第18页 |
| 2 CRISPR/Cas系统分类 | 第18页 |
| 3 CRISPR/Cas9的基因座结构 | 第18-19页 |
| 4 CRISPR/Cas9系统的作用机制与构建 | 第19-20页 |
| 5 CRISPR/Cas9系统的研究进展 | 第20-22页 |
| 第二章 试验研究 | 第22-45页 |
| 试验一 MSTN基因靶点确定及相关质粒构建 | 第22-29页 |
| 1 材料与方法 | 第22-26页 |
| 1.1 试剂与仪器 | 第22页 |
| 1.2 试验方法 | 第22-26页 |
| 1.2.1 sgRNA及检测引物的设计 | 第22-24页 |
| 1.2.2 pX330-EGFP质粒构建 | 第24页 |
| 1.2.3 pX330-EGFP-sgRNA质粒构建 | 第24-25页 |
| 1.2.4 pX330-EGFP及pX330-EGFP-SgRNA质粒的转化 | 第25-26页 |
| 1.2.5 pX330-EGFP-SgRNA去内毒素质粒的提取 | 第26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-28页 |
| 3 讨论 | 第28页 |
| 4 结论 | 第28-29页 |
| 试验二 高效靶向绵羊MSTN基因sgRNA的筛选 | 第29-35页 |
| 1 材料和方法 | 第29-31页 |
| 1.1 试剂和仪器 | 第29页 |
| 1.1.1 细胞与质粒 | 第29页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 1.2 试验方法 | 第29-31页 |
| 1.2.1 绵羊成纤维细胞的培养 | 第29页 |
| 1.2.2 电转液的配制 | 第29-30页 |
| 1.2.3 电转染细胞 | 第30页 |
| 1.2.4 SURVEYOR检测 | 第30-31页 |
| 1.2.5 测序鉴定 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-33页 |
| 2.1 pX330-EGFP-sgRNA载体转染绵羊成纤维细胞 | 第31页 |
| 2.2 SURVEYOR分析 | 第31-32页 |
| 2.3 测序结果 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 4 结论 | 第34-35页 |
| 试验三 sgRNA及Cas9蛋白显微注射浓度的优化 | 第35-39页 |
| 1 材料和方法 | 第35-37页 |
| 1.1 试剂与仪器 | 第35页 |
| 1.2 试剂的配置 | 第35页 |
| 1.3 方法 | 第35-37页 |
| 1.3.1 卵母细胞的采集 | 第35-36页 |
| 1.3.2 卵母细胞的成熟 | 第36页 |
| 1.3.3 卵母细胞的孤雌激活 | 第36页 |
| 1.3.4 孤雌激活卵母细胞的显微注射 | 第36-37页 |
| 1.3.5 测序鉴定 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-38页 |
| 2.1 测序分析 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38页 |
| 4 结论 | 第38-39页 |
| 试验四 CRISPR/Cas9系统介导的同源指导修复效率的验证 | 第39-45页 |
| 1 材料和方法 | 第39-41页 |
| 1.1 试剂与仪器 | 第39页 |
| 1.2 方法 | 第39-41页 |
| 1.2.1 寡核苷酸链(ssDNA)的设计 | 第39-40页 |
| 1.2.2 卵母细胞的采集 | 第40页 |
| 1.2.3 卵母细胞的处理与成熟 | 第40页 |
| 1.2.4 卵母细胞的体外受精 | 第40页 |
| 1.2.5 受精卵的显微注射 | 第40-41页 |
| 1.2.6 测序检测 | 第41页 |
| 1.2.7 酶切检测 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-43页 |
| 2.1 优化方案编辑效果在受精卵上的验证 | 第41-42页 |
| 2.2 酶切检测结果 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43页 |
| 4 结论 | 第43-45页 |
| 全文结论 | 第45页 |
| 创新点 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 附件 | 第59页 |
