| 本文部分缩写的中英文对照 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第12-26页 |
| 第一章 新城疫病毒研究综述 | 第12-16页 |
| 1 新城疫概况 | 第12页 |
| 2 NDV形态及其基因组结构 | 第12-13页 |
| 3 NDV各结构蛋白特征 | 第13-15页 |
| 3.1 融合蛋白(F) | 第13页 |
| 3.2 血凝素——神经氨酸酶蛋白(HN) | 第13-14页 |
| 3.3 基质蛋白(M) | 第14页 |
| 3.4 核衣壳蛋白(NP) | 第14页 |
| 3.5 磷蛋白(P) | 第14-15页 |
| 3.6 大分子蛋白(L) | 第15页 |
| 4 NDV的生物学特征 | 第15页 |
| 5 抗NDV抗体检测 | 第15-16页 |
| 5.1 血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验 | 第15-16页 |
| 5.2 中和试验(neutralization tests) | 第16页 |
| 5.3 琼脂凝胶扩散试验(AGID) | 第16页 |
| 5.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第16页 |
| 第二章 假型病毒的应用研究进展 | 第16-20页 |
| 1 假型病毒生物学特征 | 第16-17页 |
| 2 假型病毒的包装制备 | 第17页 |
| 3 假型病毒的实验室及临床应用 | 第17-20页 |
| 3.1 假型病毒宿主细胞嗜性及靶向应用 | 第17-18页 |
| 3.2 假型病毒介导的基因转导 | 第18-19页 |
| 3.3 假型病毒用于中和抗体效价评价 | 第19-20页 |
| 3.4 假型病毒的基因治疗 | 第20页 |
| 第三章 单链抗体应用研究进展 | 第20-26页 |
| 1 单链抗体结构 | 第20-21页 |
| 2 scFv的构建 | 第21页 |
| 3 scFv的表达 | 第21-23页 |
| 3.1 scFv在细菌中的表达 | 第22页 |
| 3.2 scFv在酵母细胞中的表达 | 第22页 |
| 3.3 scFv在哺乳动物细胞中的表达 | 第22-23页 |
| 4 scFv的应用 | 第23-26页 |
| 4.1 scFv在检测中的应用 | 第23页 |
| 4.2 scFv的中和作用 | 第23页 |
| 4.3 scFv的靶向作用 | 第23-24页 |
| 4.4 scFv的基因治疗作用 | 第24页 |
| 4.5 scFv在诊断中的应用 | 第24-26页 |
| 第二篇 试验研究 | 第26-57页 |
| 第一章 新城疫病毒假型病毒体系的构建 | 第26-49页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1 细胞、病毒 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-37页 |
| 2.1 病毒RNA提取和cDNA合成 | 第28页 |
| 2.2 PCR引物的设计 | 第28-30页 |
| 2.3 PCR扩增NDV的HN和F基因 | 第30-31页 |
| 2.4 PCR扩增VCT/HN、VCT-HN、F/VCT和FACT基因 | 第31-32页 |
| 2.5 重组真核表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.6 重组膜蛋白真核表达质粒鉴定 | 第33-34页 |
| 2.7 重组膜蛋白真核表达质粒表达鉴定 | 第34页 |
| 2.8 NDV假型病毒的包装及收获 | 第34页 |
| 2.9 NDV假型病毒中HN和F蛋白的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.10 NDV假型病毒感染293T细胞与Luc荧光活性检测 | 第35页 |
| 2.11 HIV-1 P24抗原定量假型病毒 | 第35页 |
| 2.12 NDV病毒和NDV假型病毒TCID_(50)测定 | 第35-36页 |
| 2.13 建立NDV假型病毒中和试验 | 第36页 |
| 2.14 NDV假型病毒中和试验与传统中和试验的比较 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-47页 |
| 3.1 HN和F基因的克隆 | 第37页 |
| 3.2 VCT/HN、VCT-HN、F/VCT和FACT基因片段的的扩增 | 第37页 |
| 3.3 重组真核表达质粒的构建和鉴定 | 第37-39页 |
| 3.4 重组真核表达质粒的表达鉴定 | 第39页 |
| 3.5 NDV假型病毒粒子中HN和F蛋白的ELISA检测 | 第39-40页 |
| 3.6 NDV假型病毒感染293T细胞后的Luciferase活性检测 | 第40-42页 |
| 3.7 影响NDV假型化HIV-Luc假型病毒感染效率的因素 | 第42-43页 |
| 3.8 NDV假型病毒中和试验的建立 | 第43-45页 |
| 3.9 NDV假型化HIV-Luc假型病毒中和试验的验证 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第二章 抗新城疫病毒HN蛋白单链抗体的原核表达及其功能鉴定 | 第49-57页 |
| 1 材料和方法 | 第50-53页 |
| 1.1 主要实验材料 | 第50页 |
| 1.2 杂交瘤细胞总RNA的提取和反转录 | 第50页 |
| 1.3 抗体全长基因的扩增及其可变区分析 | 第50-51页 |
| 1.4 VL和VH的PCR扩增 | 第51页 |
| 1.5 HN-scFv原核重组表达质粒的构建 | 第51-52页 |
| 1.6 重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第52页 |
| 1.7 包涵体复性和纯化 | 第52-53页 |
| 1.8 复性蛋白活性检测 | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-56页 |
| 2.1 全长抗HN McAb轻链和重链基因的克隆 | 第53-54页 |
| 2.2 抗体可变区VL和VH分析 | 第54页 |
| 2.3 HN-scFv原核表达质粒的构建和鉴定 | 第54-55页 |
| 2.4 HN-scFv的诱导表达及复性、纯化 | 第55页 |
| 2.5 HN-scFv的功能检测 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-57页 |
| 第三篇 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
