| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-46页 |
| ·β-内酰胺类抗生素 | 第11-18页 |
| ·β-内酰胺类抗生素的结构 | 第12-14页 |
| ·β-内酰胺类抗生素的抑菌机理 | 第14-15页 |
| ·青霉素和头孢菌素的合成途径 | 第15-18页 |
| ·青霉素扩环酶 | 第18-30页 |
| ·青霉素扩环酶简介 | 第18-19页 |
| ·不同来源的青霉素扩环酶 | 第19-22页 |
| ·青霉素扩环酶的酶学活性和底物专一性 | 第22页 |
| ·青霉素扩环酶的结构和催化机制 | 第22-30页 |
| ·对DAOCS 改造的进展 | 第30-37页 |
| ·非理性的方法 | 第30-33页 |
| ·理性突变 | 第33-37页 |
| ·本实验室对acDAOCS 的研究 | 第37-38页 |
| ·展望 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第46-57页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·菌种 | 第46-47页 |
| ·质粒 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47-48页 |
| ·缓冲液 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-56页 |
| ·E. coli 感受态的制备及转化 | 第48-49页 |
| ·碱裂法提取大肠杆菌质粒 | 第49页 |
| ·突变位点的选择 | 第49-50页 |
| ·定点突变及靶向突变 | 第50-52页 |
| ·菌体的培养与青霉素扩环酶的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·青霉素扩环酶粗酶液的获得 | 第53页 |
| ·粗酶液对青霉素G 的转化 | 第53页 |
| ·反应产物的生物检测 | 第53页 |
| ·反应产物的光谱法检测 | 第53页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第53页 |
| ·Bradford 法测定蛋白的浓度 | 第53-54页 |
| ·青霉素扩环酶的FPLC 纯化 | 第54-55页 |
| ·DAOCS 对青霉素G 动力学参数的测定 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第三章 scDAOCS 定点突变及靶向突变库的建立和筛选 | 第57-67页 |
| ·定点突变 | 第57-61页 |
| ·定点突变体的获得 | 第57页 |
| ·青霉素扩环酶蛋白的诱导表达 | 第57-58页 |
| ·青霉素G 转化的生物学方法检测 | 第58-59页 |
| ·青霉素G 转化的HPLC 方法测定 | 第59-61页 |
| ·靶向突变 | 第61-64页 |
| ·靶向突变库的建立 | 第61页 |
| ·各个突变库需要筛选的克隆数 | 第61-62页 |
| ·靶向突变库的初步筛选 | 第62-64页 |
| ·靶向突变库的复筛 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 本章小结 | 第66-67页 |
| 第四章 acDAOCS、R308I、R308L 突变体的动力学参数的测定 | 第67-80页 |
| ·acDAOCS、R308I 和 R308L 的蛋白诱导表达 | 第67-68页 |
| ·acDAOCS,R308I,R308L 的 FPLC 纯化 | 第68-73页 |
| ·阴离子交换对 acDAOCS,R308I,R308L 的初步纯化 | 第68-69页 |
| ·凝胶过滤层析对 acDAOCS,R308I、R308L 的进一步纯化 | 第69-70页 |
| ·纯化得到的 acDAOCS,R308I,R308L 的定量 | 第70-71页 |
| ·acDAOCS 催化扩环反应初速度测定的反应时间的摸索 | 第71-72页 |
| ·底物青霉素G 与产物G-7-ADCA 的浓度标准曲线的测定 | 第72-73页 |
| ·acDAOCS,R308I,R308L 对青霉素 G 的动力学参数测定 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-77页 |
| 本章小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-80页 |
| 全文小结 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及获得奖项 | 第83页 |
