| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分:CRKL在肝癌和正常肝组织的表达差异 | 第17-23页 |
| 材料和方法 | 第17-20页 |
| 1. 实验材料 | 第17-18页 |
| 1.1 肝癌临床样本及细胞系 | 第17页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第17-18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-20页 |
| 2.1 WB测定临床肝癌组织中CRKL的表达水平 | 第18-19页 |
| 2.2 免疫组化检测肝癌组织芯片中CRKL的表达水平 | 第19页 |
| 2.3 WB检测正常肝细胞和肝癌细胞中CRKL的表达水平 | 第19-20页 |
| 2.4 统计学分析 | 第20页 |
| 结果 | 第20-22页 |
| 1. CRKL在肝癌组织中总体表达水平升高 | 第20-21页 |
| 2. CRKL在肝癌样本组织芯片中高表达 | 第21页 |
| 3. CRKL在人肝癌细胞中高表达 | 第21-22页 |
| 讨论 | 第22页 |
| 小结 | 第22-23页 |
| 第二部分:CRKL过表达肝癌细胞株的构建 | 第23-33页 |
| 材料和方法 | 第23-29页 |
| 1. 实验材料 | 第23页 |
| 1.1 细胞株及菌株 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第23页 |
| 2. 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.1 构建包含CRKL的CDS区的慢病毒重组表达载体 | 第23-28页 |
| 2.2 慢病毒感染法获得CRKL过表达肝癌细胞株 | 第28-29页 |
| 结果 | 第29-32页 |
| 1. CRKL CDS区PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2. pMD19-T-CRKL克隆质粒构建 | 第30页 |
| 3. pCDH-CMV-MCS-EF1-puro-CRKL表达质粒构建 | 第30-31页 |
| 4. CRKL过表达效率的鉴定与分析 | 第31-32页 |
| 讨论 | 第32页 |
| 小结 | 第32-33页 |
| 第三部分:CRKL过表达对肝癌细胞恶性表型的影响 | 第33-40页 |
| 材料和方法 | 第33-35页 |
| 1. 实验材料 | 第33页 |
| 1.1 细胞株 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第33页 |
| 2. 实验方法 | 第33-35页 |
| 2.1 MTT法检测CRKL过表达对肝癌细胞增殖能力的影响 | 第33页 |
| 2.2 Transwell法检测CRKL过表达对肝癌细胞迁移能力的影响 | 第33-34页 |
| 2.3 Transwell法检测CRKL过表达对肝癌细胞侵袭能力的影响 | 第34页 |
| 2.4 倒置荧光显微镜观察CRKL过表达对细胞显微形态的影响 | 第34页 |
| 2.5 鬼笔环肽染色检测CRKL过表达对肝癌细胞骨架的影响 | 第34-35页 |
| 结果 | 第35-39页 |
| 1. CRKL过表达提高肝癌细胞体外增殖能力 | 第35页 |
| 2. CRKL过表达增强肝癌细胞的体外迁移能力 | 第35-36页 |
| 3. CRKL过表达增强肝癌细胞的体外侵袭能力 | 第36-37页 |
| 4. CRKL过表达影响肝癌细胞的显微形态 | 第37-38页 |
| 5. CRKL过表达影响肝癌细胞骨架结构 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39页 |
| 小结 | 第39-40页 |
| 第四部分:CRKL与miR-429 和ETV6 的关系与调控机制 | 第40-52页 |
| 材料和方法 | 第40-46页 |
| 1. 实验材料 | 第40页 |
| 1.1 细胞株 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第40页 |
| 2. 实验方法 | 第40-46页 |
| 2.1 CRKL过表达对肝癌细胞株中miR-429 和ETV6 表达水平的影响 | 第40-41页 |
| 2.2 CRKL敲降对肝癌细胞株中miR-429 和ETV6 表达水平的影响 | 第41-42页 |
| 2.3 ETV6 敲降对CRKL过表达肝癌细胞株中miR-429 和CRKL表达水平的影响 | 第42页 |
| 2.4 CRKL-miR-429 和ETV6 三者的调控关系研究 | 第42-46页 |
| 结果 | 第46-50页 |
| 1. 肝癌细胞中CRKL过表达激活ETV6-miR-429 路径 | 第46页 |
| 2. CRKL敲降抑制ETV6-miR-429 路径 | 第46-47页 |
| 3. ETV6 水平下调使CRKL过表达细胞株中miR-429 水平回升CRKL水平降低 | 第47-48页 |
| 4. CRKL-ETV6 与miR-429 的相互调控机制 | 第48-50页 |
| 4.1 miR-429 对CRKL的 3’-UTR区具有靶向抑制作用 | 第48-49页 |
| 4.2 CRKL与ETV6 直接结合来调控ETV6 的表达 | 第49页 |
| 4.3 ETV6 能够与miR-429 启动子区结合抑制其转录 | 第49-50页 |
| 讨论 | 第50-51页 |
| 小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 综述 | 第55-67页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
