| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 膜蛋白 | 第13-15页 |
| 1.1.1 生物膜与膜蛋白 | 第13-14页 |
| 1.1.2 膜蛋白的重要性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 膜蛋白的研究现状 | 第15页 |
| 1.2 水通道蛋白 | 第15-23页 |
| 1.2.1 水通道蛋白的发现 | 第15-16页 |
| 1.2.2 水通道蛋白的分类 | 第16-19页 |
| 1.2.3 水通道蛋白的结构特征 | 第19-20页 |
| 1.2.4 水通道蛋白的表达策略研究 | 第20-22页 |
| 1.2.5 藻类水通道蛋白的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3 南极冰藻 | 第23-26页 |
| 1.3.1 南极冰藻概况 | 第23-24页 |
| 1.3.2 南极衣藻Chlamydomonassp.ICE-L | 第24-26页 |
| 1.4 本论文拟采用的研究路线、目的及意义 | 第26-29页 |
| 1.4.1 本论文拟采用的研究路线 | 第26-27页 |
| 1.4.2 本论文的研究目的及意义 | 第27-29页 |
| 第二章 南极衣藻 Chlamydomonas sp.ICE-L 水通道蛋白基因Ci MIP1 的克隆与生物信息学分析 | 第29-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 藻种 | 第29页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第29页 |
| 2.1.3 仪器与试剂 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.2.1 藻种的培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2 总RNA的提取与检测 | 第31-32页 |
| 2.2.3 反转录合成cDNA | 第32页 |
| 2.2.4 CiMIP1片段的扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.5 CiMIP1完整ORF的扩增 | 第33-36页 |
| 2.2.6 CiMIP1完整ORF的回收与纯化 | 第36页 |
| 2.2.7 CiMIP1完整ORF与质粒的连接、转化 | 第36-37页 |
| 2.2.8 挑取单菌落进行阳性检测 | 第37页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-49页 |
| 2.3.1 总RNA的提取与检测 | 第38-39页 |
| 2.3.2 CiMIP1片段的扩增 | 第39-40页 |
| 2.3.3 CiMIP1完整ORF的扩增 | 第40-41页 |
| 2.3.4 生物信息学分析 | 第41-49页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第49-51页 |
| 第三章 南极衣藻Chlamydomonassp.ICE-LCiMIP1基因的表达调控 | 第51-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1 藻种 | 第51页 |
| 3.1.2 仪器与试剂 | 第51-52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.2.1 胁迫诱导 | 第52页 |
| 3.2.2 总RNA的提取与检测 | 第52页 |
| 3.2.3 反转录合成cDNA | 第52-53页 |
| 3.2.4 定量引物设计 | 第53页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR | 第53-54页 |
| 3.2.6 数据处理 | 第54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-56页 |
| 3.3.1 温度胁迫条件下CiMIP1基因的表达调控 | 第54-55页 |
| 3.3.2 盐度胁迫条件下CiMIP1基因的表达调控 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第56-59页 |
| 第四章 南极衣藻Chlamydomonassp.ICE-LCiMIP1蛋白的原核表达 | 第59-69页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 4.1.1 藻种 | 第59页 |
| 4.1.2 菌株与质粒 | 第59页 |
| 4.1.3 仪器与试剂 | 第59-61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-65页 |
| 4.2.1 总RNA的提取与检测 | 第61页 |
| 4.2.2 反转录合成cDNA | 第61页 |
| 4.2.3 CiMIP1完整ORF的调取 | 第61页 |
| 4.2.4 CiMIP1完整ORF与质粒的连接、转化 | 第61-62页 |
| 4.2.5 挑取单菌落进行阳性检测 | 第62页 |
| 4.2.6 重组质粒的提取 | 第62-63页 |
| 4.2.7 重组质粒的转化 | 第63页 |
| 4.2.8 CiMIP1蛋白的诱导表达 | 第63页 |
| 4.2.9 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第63-64页 |
| 4.2.10 Westernblot检测蛋白表达 | 第64-65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-67页 |
| 4.3.1 CiMIP1完整ORF的调取 | 第65-66页 |
| 4.3.2 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第66页 |
| 4.3.3 CiMIP1蛋白的诱导表达 | 第66-67页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第67-69页 |
| 第五章 南极衣藻Chlamydomonassp.ICE-LCiMIP1蛋白的无细胞表达 | 第69-79页 |
| 5.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第69页 |
| 5.1.2 仪器与试剂 | 第69-70页 |
| 5.2 实验方法 | 第70-74页 |
| 5.2.1 无细胞表达体系的配制 | 第70-71页 |
| 5.2.2 无细胞表达载体的构建与纯化 | 第71-72页 |
| 5.2.3 CiMIP1蛋白的无细胞表达 | 第72页 |
| 5.2.4 CiMIP1蛋白的纯化 | 第72页 |
| 5.2.5 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第72-73页 |
| 5.2.6 Westernblot检测蛋白表达 | 第73页 |
| 5.2.7 蛋白浓度的测定与保存 | 第73-74页 |
| 5.3 结果与分析 | 第74-77页 |
| 5.3.1 无细胞表达载体的构建与纯化 | 第74-75页 |
| 5.3.2 CiMIP1蛋白的小量无细胞表达 | 第75页 |
| 5.3.3 CiMIP1蛋白的大量无细胞表达与纯化 | 第75-76页 |
| 5.3.4 CiMIP1蛋白浓度测定与冻干 | 第76-77页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第77-79页 |
| 第六章 总结及后续工作计划 | 第79-83页 |
| 6.1 总结 | 第79-80页 |
| 6.2 后续工作计划 | 第80-83页 |
| 论文创新点 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-95页 |
| 作者简历 | 第95页 |
| 硕士期间发表文章 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
