| CATALOG | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 主要符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 研究背景 | 第15-27页 |
| 1.1 乳糖酶的结构与作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2 不同来源乳糖酶的酶学性质 | 第16-19页 |
| 1.2.1 细菌来源的乳糖酶 | 第18页 |
| 1.2.2 酵母菌来源的乳糖酶 | 第18页 |
| 1.2.3 霉菌来源的乳糖酶 | 第18-19页 |
| 1.3 产乳糖酶微生物的改造 | 第19-20页 |
| 1.4 乳糖酶的应用 | 第20-22页 |
| 1.4.1 治疗乳糖不耐症 | 第20页 |
| 1.4.2 提高乳制品质量 | 第20页 |
| 1.4.3 应用于发酵乳制品 | 第20-21页 |
| 1.4.4 应用于乳清的处理与综合应用 | 第21页 |
| 1.4.5 应用于生产低聚半乳糖 | 第21页 |
| 1.4.6 在分子生物学中的应用 | 第21-22页 |
| 1.5 斯德毕赤酵母表达系统 | 第22-26页 |
| 1.5.1 毕赤酵母表达系统的优点 | 第22页 |
| 1.5.2 常用毕赤酵母宿主菌 | 第22-23页 |
| 1.5.3 常用毕赤酵母表达载体和元件 | 第23-24页 |
| 1.5.4 影响毕赤酵母表达外源蛋白的因素 | 第24-26页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 米曲霉乳糖酶的克隆及在毕赤酵母中的高效表达 | 第27-46页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第27页 |
| 2.1.2 试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 培养基 | 第27-28页 |
| 2.1.4 仪器 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-37页 |
| 2.2.1 米曲霉乳糖酶基因的提取 | 第28-32页 |
| 2.2.2 米曲霉乳糖酶基因序列的分析与优化 | 第32页 |
| 2.2.3 乳糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第32-35页 |
| 2.2.4 乳糖酶活性的测定 | 第35-37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-45页 |
| 2.3.1 米曲霉RNA的提取 | 第37页 |
| 2.3.2 米曲霉乳糖酶的克隆 | 第37-38页 |
| 2.3.3 乳糖酶基因序列分析 | 第38页 |
| 2.3.4 乳糖酶基因序列优化 | 第38-41页 |
| 2.3.5 乳糖酶基因表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.3.6 制备毕赤酵母感受态细胞 | 第42页 |
| 2.3.7 重组酵母的构建及验证 | 第42-43页 |
| 2.3.8 目的蛋白的表达测定 | 第43-45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 毕赤酵母工程菌产乳糖酶发酵条件的优化 | 第46-58页 |
| 3.1 材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 菌株 | 第46页 |
| 3.1.2 试剂 | 第46页 |
| 3.1.3 培养基 | 第46页 |
| 3.1.4 仪器 | 第46-47页 |
| 3.2 方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 乳糖酶活力的测定 | 第47页 |
| 3.2.2 菌株活化与初筛 | 第47页 |
| 3.2.3 碳源对乳糖酶发酵的影响试验 | 第47页 |
| 3.2.4 碳源浓度对乳糖酶发酵的影响试验 | 第47-48页 |
| 3.2.5 氮源对乳糖酶发酵的影响试验 | 第48页 |
| 3.2.6 氮源浓度对乳糖酶发酵的影响试验 | 第48页 |
| 3.2.7 无机盐离子浓度对乳糖酶发酵的影响试验 | 第48页 |
| 3.2.8 发酵条件对乳糖酶发酵的影响试验 | 第48页 |
| 3.2.9 碳源流加速度对乳糖酶发酵的影响试验 | 第48-49页 |
| 3.2.10 50L发酵中试 | 第49页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第49-57页 |
| 3.3.1 碳源对乳糖酶发酵的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.2 碳源浓度对乳糖酶发酵的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.3 氮源对乳糖酶发酵的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.4 氮源浓度对乳糖酶酶活的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.5 无机盐离子对乳糖酶酶活的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.6 发酵条件对乳糖酶发酵的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.7 碳源流加速度对乳糖酶发酵的影响 | 第55-57页 |
| 3.3.8 50L中试发酵分析 | 第57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 重组乳糖酶酶学性质的研究 | 第58-66页 |
| 4.1 材料 | 第58页 |
| 4.1.1 材料 | 第58页 |
| 4.1.2 试剂与溶液 | 第58页 |
| 4.1.3 仪器 | 第58页 |
| 4.2 方法 | 第58-59页 |
| 4.2.1 乳糖酶活力的测定 | 第58-59页 |
| 4.2.2 乳糖酶样品的纯化与制备 | 第59页 |
| 4.2.3 最适pH、pH稳定性的测定 | 第59页 |
| 4.2.4 最适温度、热稳定性的测定 | 第59页 |
| 4.2.5 金属离子及化学试剂对乳糖酶的影响 | 第59页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第59-64页 |
| 4.3.1 乳糖酶样品的纯化与制备 | 第59-61页 |
| 4.3.2 最适pH、pH稳定性的测定 | 第61-62页 |
| 4.3.3 最适温度、热稳定性的测定 | 第62-64页 |
| 4.3.4 金属离子及化学试剂的影响 | 第64页 |
| 4.4 本章小结 | 第64-66页 |
| 第五章 乳糖酶水解新鲜牛奶中乳糖的应用效果研究 | 第66-72页 |
| 5.1 材料 | 第66页 |
| 5.1.1 材料与试剂 | 第66页 |
| 5.1.2 仪器 | 第66页 |
| 5.2 方法 | 第66-67页 |
| 5.2.1 乳糖酶活力的测定 | 第66页 |
| 5.2.2 乳糖酶制剂的制备 | 第66页 |
| 5.2.3 低乳糖牛奶的制备 | 第66-67页 |
| 5.2.4 牛奶中乳糖含量的测定 | 第67页 |
| 5.2.5 乳糖水解率的计算 | 第67页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第67-70页 |
| 5.3.1 乳糖酶制剂的制备 | 第67页 |
| 5.3.2 牛奶中乳糖含量的测定 | 第67-69页 |
| 5.3.3 在37℃条件下的乳糖水解率 | 第69页 |
| 5.3.4 在10℃和25℃条件下乳糖酶不同添加量对乳糖水解率的影响 | 第69-70页 |
| 5.3.5 低乳糖牛奶的感官表现 | 第70页 |
| 5.4 本章小结 | 第70-72页 |
| 总结 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第86-87页 |
| 附表 | 第87页 |