| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词 | 第8-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-29页 |
| 1.1 GBV-C病毒的简介 | 第13-20页 |
| 1.1.1 GBV-C病毒的发现 | 第13页 |
| 1.1.2 GBV-C病毒的基因结构与分型 | 第13-15页 |
| 1.1.3 GBV-C病毒的流行病学和相关疾病 | 第15-17页 |
| 1.1.4 GBV-C病毒的检测 | 第17-19页 |
| 1.1.5 GBV-C病毒与HIV的相互作用 | 第19-20页 |
| 1.2 HIV的简介 | 第20-23页 |
| 1.2.1 HIV的发现及其结构特征 | 第20-22页 |
| 1.2.2 HIV的感染与检测 | 第22-23页 |
| 1.3 荧光素酶的简介 | 第23-26页 |
| 1.3.1 常用的荧光素酶的简介 | 第23-25页 |
| 1.3.2 Gaussia荧光素酶的简介及其在生物检测中的应用 | 第25-26页 |
| 1.4 本课题的研究意义与实验设计 | 第26-29页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第26-27页 |
| 1.4.2 实验设计 | 第27-29页 |
| 1.4.2.1 转染质粒的构建 | 第27页 |
| 1.4.2.2 融合表达蛋白的鉴定 | 第27-28页 |
| 1.4.2.3 检测条件的优化 | 第28页 |
| 1.4.2.4 对血清进行检测 | 第28-29页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第29-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第29页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.4 常用试剂配制 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-44页 |
| 2.2.1 对照质粒pCDNA3.1-GLuc质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.1.1 GLuc基因的获得 | 第32-33页 |
| 2.2.1.2 T-easy-GLuc质粒的构建 | 第33页 |
| 2.2.1.3 pCDNA3.1-GLuc的构建 | 第33页 |
| 2.2.2 GLuc与AF-E2和P24重组质粒的构建 | 第33-37页 |
| 2.2.2.1 GBV-C AF-E2基因的获取 | 第33-35页 |
| 2.2.2.2 HIV P24基因的获取 | 第35-36页 |
| 2.2.2.3 T-easy-AF-E2与T-easy-P24质粒的构建 | 第36页 |
| 2.2.2.4 pCDNA3.1-GLuc-L质粒的构建 | 第36页 |
| 2.2.2.5 GLuc-L-AF-E2与GLuc-L-P24质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.2.6 构建的质粒的扩增和大量提取 | 第37页 |
| 2.2.3 质粒转染细胞及融合蛋白表达的鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.3.1 质粒转染293T细胞 | 第37-38页 |
| 2.2.3.2 GLuc融合蛋白活性的检测 | 第38页 |
| 2.2.3.3 Western-Blot对GLuc融合表达蛋白的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.3.4 收获上清时间的探索 | 第39页 |
| 2.2.4 融合蛋白荧光特点的鉴定及检测条件的优化 | 第39-43页 |
| 2.2.4.1 融合蛋白GLuc-L-AF-E2,GLuc-L-P24的荧光特点 | 第39-40页 |
| 2.2.4.2 对于稳定剂含量的探索 | 第40页 |
| 2.2.4.3 稳定剂对不同浓度融合蛋白荧光的影响 | 第40页 |
| 2.2.4.4 对于检测时间的探索 | 第40-41页 |
| 2.2.4.5 荧光强度与融合蛋白浓度的关系 | 第41页 |
| 2.2.4.6 GIPS检测中最佳血清用量的确定 | 第41-43页 |
| 2.2.5 GIPS对HIV血清和GBV-C血清的检测 | 第43-44页 |
| 2.2.5.1 GIPS对GBV-C血清的检测 | 第43页 |
| 2.2.5.2 GIPS对HIV血清的检测 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-63页 |
| 3.1 表达质粒的构建 | 第44-47页 |
| 3.1.1 对照质粒pCDNA3.1-GLuc质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.1.2 GLuc与AF-E2和P24重组质粒的构建 | 第45-47页 |
| 3.2 质粒转染细胞及融合蛋白表达的鉴定 | 第47-51页 |
| 3.2.1 质粒转染293T细胞 | 第47页 |
| 3.2.2 融合蛋白表达及分泌情况的检测 | 第47-48页 |
| 3.2.3 Western-Blot对融合蛋白的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.4 细胞上清收获时间的确定 | 第49-51页 |
| 3.3 融合蛋白荧光特点的鉴定及检测条件的优化 | 第51-60页 |
| 3.3.1 融合蛋白GLuc-L-AF-E2和GLuc-L-P24的荧光特点 | 第51-52页 |
| 3.3.2 最佳稳定剂含量的确定 | 第52-54页 |
| 3.3.3 稳定剂对不同浓度融合蛋白荧光的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.4 最佳检测时间的确定 | 第55-56页 |
| 3.3.5 荧光强度和融合蛋白浓度的关系 | 第56-57页 |
| 3.3.6 GIPS检测中最佳血清用量的确定 | 第57-60页 |
| 3.4 GIPS对HIV血清和GBV-C血清的检测 | 第60-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
