| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第12-18页 |
| 1.1 犊牛腹泻产肠毒素型大肠杆菌病原学 | 第12-13页 |
| 1.2 菌毛生物学特性及研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 Ⅰ型菌毛结构 | 第13-14页 |
| 1.2.2 P型菌毛 | 第14-15页 |
| 1.2.3 CSI菌毛 | 第15页 |
| 1.2.4 CFA/I菌毛 | 第15页 |
| 1.2.5 Dra菌毛 | 第15页 |
| 1.3 犊牛腹泻大肠杆菌病的感染途径 | 第15页 |
| 1.4 犊牛腹泻大肠杆菌病的防制 | 第15-16页 |
| 1.5 试验研究背景及意义 | 第16-18页 |
| 2 试验材料 | 第18-19页 |
| 2.1 试验菌株及载体 | 第18页 |
| 2.2 试验小鼠及家兔 | 第18页 |
| 2.3 主要试剂 | 第18页 |
| 2.4 主要仪器 | 第18页 |
| 2.5 所用在线分析软件 | 第18-19页 |
| 3 试验方法 | 第19-34页 |
| 3.1 大肠杆菌菌株的分离与鉴定 | 第19-23页 |
| 3.1.1 样品的采集与菌株纯化 | 第19页 |
| 3.1.2 生化及药物敏感性试验 | 第19页 |
| 3.1.3 分离菌的动物致病性试验及半数致死量测定 | 第19页 |
| 3.1.4 菌株16SrRNA的PCR鉴定 | 第19-23页 |
| 3.1.5 大肠杆菌O-抗原鉴定 | 第23页 |
| 3.2 犊牛腹泻大肠杆菌病流行病学调查 | 第23-24页 |
| 3.3 大肠杆菌菌毛F41毒力基因克隆鉴定 | 第24-26页 |
| 3.3.1 菌毛F41基因扩增引物设计 | 第24页 |
| 3.3.2 大肠杆菌DNA提取 | 第24页 |
| 3.3.3 菌毛F41基因序列扩增 | 第24页 |
| 3.3.4 PCR产物胶回收 | 第24页 |
| 3.3.5 TA克隆的构建 | 第24页 |
| 3.3.6 连接产物的转化 | 第24页 |
| 3.3.7 重组表达质粒pMD-18T-F41的鉴定 | 第24-26页 |
| 3.4 原核表达载体的构建 | 第26-29页 |
| 3.4.1 pET-28a(+)图谱 | 第26页 |
| 3.4.2 pMD-18T-F41和pET-28a(+)重组质粒提取 | 第26-27页 |
| 3.4.3 重组质粒pMD-18T-F41和pET-28a(+)双酶切 | 第27页 |
| 3.4.4 pMD-18T-F41和pET-28a(+)双酶切产物连接 | 第27-28页 |
| 3.4.5 BL21感受态细胞制备 | 第28页 |
| 3.4.6 连接产物的转化 | 第28页 |
| 3.4.7 重组表达质粒pET-28a-F41的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.4.8 重组表达质粒pET-28a-F41测序 | 第29页 |
| 3.5 pET-28a-F41诱导表达蛋白融合蛋白鉴定 | 第29-32页 |
| 3.5.1 pET-28a-F41的诱导表达 | 第29-30页 |
| 3.5.2 pET-28a-F41蛋白表达的检测 | 第30页 |
| 3.5.3 犊牛腹泻大肠杆菌抗F41抗体的制备 | 第30-31页 |
| 3.5.4 动物免疫试验 | 第31页 |
| 3.5.5 Westernblotting | 第31-32页 |
| 3.6 犊牛腹泻产肠毒素型大肠杆菌菌毛F41毒力基因相关生物学分析 | 第32页 |
| 3.6.1 ExPASYProtParam软件对菌毛F41基因编码的蛋白进行分析 | 第32页 |
| 3.6.2 DNAStar软件分析F41蛋白抗原指数及骨架韧性 | 第32页 |
| 3.6.3 TMHMM2.0对菌毛F41氨基酸序列进行跨膜预测分析 | 第32页 |
| 3.6.4 ExPASYTragetP在线分析软件分析菌毛F41蛋白亚细胞定位 | 第32页 |
| 3.6.5 ExPASYSOPMA在线分析软件预测菌毛F41蛋白二级结构 | 第32页 |
| 3.6.6 Swiss-model软件构建菌毛F41蛋白三级结构 | 第32页 |
| 3.7 菌毛F41蛋白对犊牛腹泻产肠毒素型大肠杆菌免疫保护试验 | 第32-34页 |
| 3.7.1 F41蛋白的准备 | 第32页 |
| 3.7.2 小鼠免疫 | 第32-33页 |
| 3.7.3 小鼠攻毒试验 | 第33-34页 |
| 4 试验结果 | 第34-46页 |
| 4.1 犊牛腹泻大肠杆菌病分离鉴定 | 第34-39页 |
| 4.1.1 患病犊牛病理变化及发病症状 | 第34页 |
| 4.1.2 分离菌株菌落形态 | 第34-35页 |
| 4.1.3 分离菌株镜检结果 | 第35页 |
| 4.1.4 动物致病性试验 | 第35页 |
| 4.1.5 分离株生化试验 | 第35-37页 |
| 4.1.6 药物敏感性试验结果 | 第37页 |
| 4.1.7 分离菌株16SrRNAPCR鉴定 | 第37-38页 |
| 4.1.8 大肠杆菌O-抗原鉴定结果 | 第38-39页 |
| 4.2 流行病学调查结果 | 第39-40页 |
| 4.3 大肠杆菌菌毛F41克隆鉴定结果 | 第40-42页 |
| 4.3.1 菌毛F41毒力基因PCR扩增结果 | 第40页 |
| 4.3.2 重组质粒pMD-18T-F41双酶切鉴定结果 | 第40-41页 |
| 4.3.3 重组质粒pMD-18T-F41PCR方法鉴定结果 | 第41页 |
| 4.3.4 重组表达质粒pET-28a-F41双酶切鉴定结果 | 第41-42页 |
| 4.3.5 重组表达质粒pET-28a-F41PCR鉴定结果 | 第42页 |
| 4.4 pET-28a-F41原核表达产物SDS-PAGE鉴定结果 | 第42-43页 |
| 4.5 pET-28a-F41原核表达产物Westernblotting检测结果 | 第43页 |
| 4.6 生物学分析结果 | 第43-45页 |
| 4.7 小鼠攻毒后情况 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| 6 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
