| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 植物雄性不育 | 第13-17页 |
| 1.1.1 植物雄性不育的概念 | 第13-14页 |
| 1.1.2 植物雄性不育的类型 | 第14-15页 |
| 1.1.3 植物雄性不育的来源 | 第15-16页 |
| 1.1.4 植物雄性不育的表现特征 | 第16-17页 |
| 1.2 洋葱细胞质雄性不育的研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 洋葱细胞质雄性不育的类型 | 第17-18页 |
| 1.2.2 洋葱细胞质雄性不育的细胞学特征 | 第18-19页 |
| 1.2.3 洋葱细胞质雄性不育分子机理的研究 | 第19-21页 |
| 1.2.4 细胞质雄性不育研究的意义 | 第21-22页 |
| 1.3 分子标记辅助选择技术的应用 | 第22-25页 |
| 1.3.1 分子标记技术的发展 | 第22页 |
| 1.3.2 分子标记技术在洋葱育种中的应用 | 第22-25页 |
| 1.3.2.1 细胞质雄性不育RFLP标记 | 第23页 |
| 1.3.2.2 基于PCR的细胞质不育分子标记 | 第23-24页 |
| 1.3.2.3 细胞质雄性不育SNP标记 | 第24-25页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株 | 第26页 |
| 2.1.3 载体 | 第26页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 洋葱总DNA提取 | 第26页 |
| 2.2.2 洋葱总RNA的提取与cDNA的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 洋葱总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.2.2 洋葱cDNA的制备 | 第27页 |
| 2.2.3 电泳检测 | 第27-28页 |
| 2.2.4 PCR产物的回收与纯化 | 第28页 |
| 2.2.5 平末端加A反应与目的基因的连接 | 第28-29页 |
| 2.2.5.1 平末端加A反应 | 第28页 |
| 2.2.5.2 连接T载体 | 第28页 |
| 2.2.5.3 T4连接酶连接 | 第28-29页 |
| 2.2.5.4 无缝连接 | 第29页 |
| 2.2.6 重组质粒的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.6.1 目的基因的TA克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.6.2 重组质粒转化农杆菌 | 第30页 |
| 2.2.7 质粒DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.8 拟南芥的侵染与抗性筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.8.1 浸花法侵染拟南芥 | 第30-31页 |
| 2.2.8.2 转基因拟南芥的抗性筛选 | 第31页 |
| 2.2.9 本试验中的PCR扩增反应 | 第31-35页 |
| 2.2.9.1 PCR引物合成 | 第31页 |
| 2.2.9.258 个ORF的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.9.3 orf393全长序列的扩增 | 第32页 |
| 2.2.9.4 实时荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 2.2.9.5 分子标记的开发与验证 | 第33页 |
| 2.2.9.6 线粒体靶向肽基因Rf1b的获得 | 第33-34页 |
| 2.2.9.7 目的基因orf393的获得 | 第34页 |
| 2.2.9.8 嵌合基因Rf1b-orf393的菌落PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.9.9 转基因植株的卡那霉素抗性基因检测 | 第35页 |
| 2.2.10 本试验中的酶切反应 | 第35-38页 |
| 2.2.10.1 克隆载体pUC18的线性化 | 第35页 |
| 2.2.10.2 重组质粒pUC18-Rf1b-orf393的酶切验证 | 第35-36页 |
| 2.2.10.3 载体pROK2的线性化及功能验证载体的构建 | 第36页 |
| 2.2.10.4 重组质粒pROK2-Rf1b-orf393的酶切验证 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-51页 |
| 3.1 洋葱细胞质雄性不育候选基因的挖掘 | 第38-39页 |
| 3.2 orf393在洋葱S型细胞质雄性不育系和保持系中的DNA序列分析 | 第39-40页 |
| 3.3 细胞质雄性不育相关基因orf393的应用 | 第40-42页 |
| 3.3.1 SCAR标记的开发 | 第40-41页 |
| 3.3.2 标记GXX393在多个洋葱S型细胞质雄性不育系和保持系中的验证 | 第41-42页 |
| 3.4 orf393在洋葱S型细胞质雄性不育系和保持系中的时空表达分析 | 第42-43页 |
| 3.5 orf393在拟南芥中的功能初探 | 第43-51页 |
| 3.5.1 功能验证载体pROK2-Rf1b-orf393的构建 | 第43-46页 |
| 3.5.1.1 线粒体靶向肽基因Rf1b和目的基因orf393的获得 | 第43页 |
| 3.5.1.2 克隆载体pUC18的线性化 | 第43-44页 |
| 3.5.1.3 连接、转化和阳性克隆的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.5.1.4 载体pROK2的线性化及功能验证载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.5.2 转基因拟南芥的获得与表型观察 | 第46-51页 |
| 3.5.2.1 重组质粒pROK2-Rf1b-orf393转化农杆菌GV | 第46-47页 |
| 3.5.2.2 农杆菌介导的遗传转化与转基因植株的鉴定 | 第47-49页 |
| 3.5.2.3 转基因拟南芥的表型观察 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 洋葱CMS与线粒体基因的关系 | 第51页 |
| 4.2 洋葱CMS分子标记的开发 | 第51-52页 |
| 4.3 洋葱CMS花粉败育时期与特征 | 第52-53页 |
| 4.4 洋葱orf393基因在拟南芥中的功能初探 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第68页 |
