缩略语表 | 第8-12页 |
中文摘要 | 第12-15页 |
Abstract | 第15-17页 |
前言 | 第18-19页 |
文献回顾 | 第19-34页 |
1 胰腺癌的危险因素 | 第19-24页 |
2 精神应激和胰腺癌 | 第24-25页 |
3 胰腺癌的分子机制 | 第25-27页 |
4 NF-κB 和癌症 | 第27-29页 |
5 NF-κB 相关 miRNA | 第29-31页 |
6 RNA 结合蛋白 QKI | 第31-34页 |
第一部分 肾上腺素对胰腺癌细胞的影响 | 第34-40页 |
引言 | 第34页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第34-35页 |
1.1 实验材料 | 第34页 |
1.2 主要试剂 | 第34-35页 |
1.3 主要仪器 | 第35页 |
2 方法 | 第35-37页 |
2.1 细胞培养与处理 | 第35页 |
2.2 流式细胞仪检测细胞周期 | 第35-36页 |
2.3 四唑盐(MTT)比色法检测细胞生长情况 | 第36页 |
2.4 Annexin-Ⅴ-FITC/PI 双染检测细胞凋亡 | 第36页 |
2.5 免疫印迹法(western-blotting)检测细胞凋亡 | 第36-37页 |
2.5.1 细胞总蛋白的获取 | 第36页 |
2.5.2 SDS-PAGE 电泳和转移 | 第36-37页 |
2.5.3 western-blotting | 第37页 |
3 结果 | 第37-39页 |
3.1 肾上腺素影响 PANC-1 细胞的周期分布 | 第37页 |
3.2 肾上腺素对细胞增殖的影响 | 第37-38页 |
3.3 肾上腺素对顺铂诱导的细胞凋亡的影响 | 第38-39页 |
4 讨论 | 第39-40页 |
第二部分 肾上腺素通过活化 NF-κB 促进细胞增殖和减少凋亡 | 第40-45页 |
引言 | 第40页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第40-41页 |
1.1 实验材料 | 第40页 |
1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
1.3 主要仪器 | 第41页 |
2 方法 | 第41-42页 |
2.1 胞浆/胞核蛋白分离提取(NE-PER 胞浆胞核提取试剂盒) | 第41页 |
2.2 免疫印迹法(western-blotting) | 第41-42页 |
2.2.1 蛋白的处理 | 第41页 |
2.2.2 SDS-PAGE 电泳和转移 | 第41页 |
2.2.3 western-blotting | 第41-42页 |
2.3 BAY 11-7082 的使用和细胞处理 | 第42页 |
2.4 MTT 和凋亡检测 | 第42页 |
3 结果 | 第42-44页 |
3.1 肾上腺素促进 NF-κB 的活化 | 第42-43页 |
3.2 抑制 NF-κB 的活性对肾上腺素诱导的 PANC-1 细胞增殖和抗凋亡的影响 | 第43-44页 |
4 讨论 | 第44-45页 |
第三部分 miR-155 在肾上腺素-NF-κB 信号所致的细胞增殖和抗凋亡中的作用 | 第45-53页 |
引言 | 第45页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第45-46页 |
1.1 实验材料 | 第45页 |
1.2 主要试剂 | 第45-46页 |
1.3 主要仪器 | 第46页 |
2 方法 | 第46-48页 |
2.1 RNA 的提取和反转录 | 第46-47页 |
2.1.1 RNA 提取 | 第46页 |
2.1.2 RNA 浓度测定 | 第46页 |
2.1.3 反转录 | 第46-47页 |
2.2 qRT-PCR 检测 MicroRNA 的表达 | 第47页 |
2.2.1 qRT-PCR 引物 | 第47页 |
2.2.2 反应体系 | 第47页 |
2.2.3 qRT-PCR 反应 | 第47页 |
2.3 细胞转染 | 第47-48页 |
2.3.1 用于转染的 RNAi duplexes | 第47页 |
2.3.2 利用 LipofectamineTM2000 转染系统进行转染 | 第47-48页 |
2.4 MTT 和凋亡检测 | 第48页 |
3 结果 | 第48-51页 |
3.1 肾上腺素-NF-κB 信号对 miR-155 的影响 | 第48页 |
3.2 外源性 miR-155 对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第48-50页 |
3.3 抑制 miR-155 对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第50-51页 |
4 讨论 | 第51-53页 |
第四部分 肾上腺素影响 NF-κB 信号的机制探讨 | 第53-58页 |
引言 | 第53页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第53-54页 |
1.1 实验材料 | 第53页 |
1.2 主要试剂 | 第53-54页 |
1.3 主要仪器 | 第54页 |
2 方法 | 第54-56页 |
2.1 目的基因的 qRT-PCR 检测 | 第54-56页 |
2.1.1 qRT-PCR 引物 | 第54-55页 |
2.1.2 RNA 提取及浓度测定 | 第55页 |
2.1.3 反转录为 cDNA | 第55页 |
2.1.4 qRT-PCR 反应体系 | 第55页 |
2.1.5 qRT-PCR 反应 | 第55-56页 |
2.2 细胞转染 | 第56页 |
3 结果 | 第56-57页 |
3.1 肾上腺素对 QKI 的影响 | 第56页 |
3.2 过表达 QKI 对 NF-κB 转录活性的影响 | 第56-57页 |
4 讨论 | 第57-58页 |
小结 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-70页 |
个人简历和研究成果 | 第70-71页 |
致谢 | 第71页 |