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RNA二级结构在果蝇Dscam基因外显子4和6互斥可变剪接中的作用研究

致谢第5-6页
中文摘要第6-8页
Abstract第8-9页
缩略语第10-11页
目次第11-15页
第1章 文献综述第15-28页
    1.1 前言第15-16页
    1.2 前体mRNA的转录后加工第16-19页
        1.2.1 基因的转录第16页
        1.2.2 RNA剪接加工第16-18页
        1.2.3 RNA编辑和修饰第18-19页
    1.3 RNA的可变剪接第19-24页
        1.3.1 RNA可变剪接的发现第19页
        1.3.2 RNA可变剪接的类型第19-20页
        1.3.3 RNA可变剪接的重要性第20-21页
        1.3.4 RNA可变剪接的影响因素第21-24页
    1.4 RNA的互斥可变剪接第24-28页
        1.4.1 RNA互斥可变剪接现象第24页
        1.4.2 RNA互斥可变剪接的典范——Dscam基因第24-25页
        1.4.3 RNA互斥可变剪接存在的价值和意义第25页
        1.4.4 RNA互斥可变剪接作用机制的研究现状第25-28页
第2章 RNA二级结构对果蝇Dscam基因外显子4互斥可变剪接的影响研究第28-53页
    2.1 序言第28-29页
    2.2 实验内容第29-30页
    2.3 技术路线第30-31页
    2.4 材料与方法第31-40页
        2.4.1 材料与试剂第31-32页
        2.4.2 实验方法第32-40页
    2.5 实验结果与分析第40-50页
        2.5.1 生物信息学分析发现:果蝇Dscam基因互斥外显子4的内含子中的保守序列具有特异性第40-45页
        2.5.2 果蝇Dscam基因互斥外显子4的特异保守序列对互斥外显子4互斥可变剪接的影响第45-48页
        2.5.3 minigene的突变、回复实验第48-50页
    2.6 讨论第50-53页
        2.6.1 果蝇Dscam基因外显子4的内含子中存在保守序列,互补配对形成RNA茎环结构与预测的锚定位点-选择序列模型一致第50-51页
        2.6.2 Minigene构建转染实验证实:内含子RNA形成的保守二级结构对果蝇Dscam基因外显子4的互斥可变剪接具有调控作用第51-52页
        2.6.3 锚定位点-选择序列模型剪接机制是一种适用于多种互斥可变剪接基因的普遍机制第52-53页
第3章 RNA二级结构对果蝇Dscam基因外显子6互斥可变剪接的影响研究.第53-73页
    3.1 序言第53页
    3.2 实验内容第53-54页
    3.3 技术路线第54页
    3.4 材料与方法第54-55页
    3.5 实验结果与分析第55-68页
        3.5.1 实验设计第55页
        3.5.2 构建minigene第55-56页
        3.5.3 通过大片段删除实验寻找锚定位点前内含子序列中的保守元件第56-58页
        3.5.4 锚定位点前面内含子可以形成特殊的六叶形二级结构第58-60页
        3.5.5 内含子中这六个茎环结构的删除会明显降低剪接效率第60-61页
        3.5.6 单个内含子茎环结构可以部分取代整体六个茎环结构的作用第61-63页
        3.5.7 这种六个茎环结构组成增强子的形式在果蝇物种中是保守的第63-66页
        3.5.8 在其他昆虫物种中也存在相似的结构第66-68页
        3.5.9 在昆虫纲以外的甲壳纲物种水蚤中也存在相似的结构并通过实验证实第68页
    3.6 讨论第68-73页
        3.6.1 果蝇Dscam基因外显子5、6之间内含子分段删除实验证实该800bp片段内存在特异调节该基因外显子6互斥可变剪接机制的元件第69-70页
        3.6.2 果蝇Dscam基因外显子5、6之间内含子可形成保守的有六个茎环结构的RNA二级结构第70页
        3.6.3 果蝇Dscam基因外显子5、6之间内含子形成的保守二级结构的每一个茎环结构都单独具备增强子的功能第70-71页
        3.6.4 其它物种Dscam基因外显子5、6之间的内含子也存在类似的六个茎环结构组成的RNA二级结构第71-73页
第4章 RNA结合蛋白与特异RNA序列的互作研究第73-90页
    4.1 序言第73-74页
    4.2 技术路线第74页
    4.3 材料与方法第74-81页
        4.3.1 材料与试剂第74-78页
        4.3.2 实验方法第78-81页
    4.4 实验结果与分析第81-86页
        4.4.1 RNA结合蛋白的原核表达第81-82页
        4.4.2 原核表达蛋白的纯化第82-83页
        4.4.3 目标RNA的制备第83-84页
        4.4.4 EMSA实验验RNA结合蛋白与目标RNA的结合能力第84-86页
    4.5 讨论第86-90页
        4.5.1 RNA结合蛋白的成功表达和纯化第87-88页
        4.5.2 EMSA实验——果蝇14-3-3ζ基因互斥外显子和内含子特定序列和果蝇Dscam基因外显子6的类增强子序列与RNA结合蛋白的亲和力分析第88-90页
第5章 展望第90-91页
博士在读期间的学术成绩第91-92页
参考文献第92-104页

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