致谢 | 第5-6页 |
中文摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
缩略语 | 第10-11页 |
目次 | 第11-15页 |
第1章 文献综述 | 第15-28页 |
1.1 前言 | 第15-16页 |
1.2 前体mRNA的转录后加工 | 第16-19页 |
1.2.1 基因的转录 | 第16页 |
1.2.2 RNA剪接加工 | 第16-18页 |
1.2.3 RNA编辑和修饰 | 第18-19页 |
1.3 RNA的可变剪接 | 第19-24页 |
1.3.1 RNA可变剪接的发现 | 第19页 |
1.3.2 RNA可变剪接的类型 | 第19-20页 |
1.3.3 RNA可变剪接的重要性 | 第20-21页 |
1.3.4 RNA可变剪接的影响因素 | 第21-24页 |
1.4 RNA的互斥可变剪接 | 第24-28页 |
1.4.1 RNA互斥可变剪接现象 | 第24页 |
1.4.2 RNA互斥可变剪接的典范——Dscam基因 | 第24-25页 |
1.4.3 RNA互斥可变剪接存在的价值和意义 | 第25页 |
1.4.4 RNA互斥可变剪接作用机制的研究现状 | 第25-28页 |
第2章 RNA二级结构对果蝇Dscam基因外显子4互斥可变剪接的影响研究 | 第28-53页 |
2.1 序言 | 第28-29页 |
2.2 实验内容 | 第29-30页 |
2.3 技术路线 | 第30-31页 |
2.4 材料与方法 | 第31-40页 |
2.4.1 材料与试剂 | 第31-32页 |
2.4.2 实验方法 | 第32-40页 |
2.5 实验结果与分析 | 第40-50页 |
2.5.1 生物信息学分析发现:果蝇Dscam基因互斥外显子4的内含子中的保守序列具有特异性 | 第40-45页 |
2.5.2 果蝇Dscam基因互斥外显子4的特异保守序列对互斥外显子4互斥可变剪接的影响 | 第45-48页 |
2.5.3 minigene的突变、回复实验 | 第48-50页 |
2.6 讨论 | 第50-53页 |
2.6.1 果蝇Dscam基因外显子4的内含子中存在保守序列,互补配对形成RNA茎环结构与预测的锚定位点-选择序列模型一致 | 第50-51页 |
2.6.2 Minigene构建转染实验证实:内含子RNA形成的保守二级结构对果蝇Dscam基因外显子4的互斥可变剪接具有调控作用 | 第51-52页 |
2.6.3 锚定位点-选择序列模型剪接机制是一种适用于多种互斥可变剪接基因的普遍机制 | 第52-53页 |
第3章 RNA二级结构对果蝇Dscam基因外显子6互斥可变剪接的影响研究. | 第53-73页 |
3.1 序言 | 第53页 |
3.2 实验内容 | 第53-54页 |
3.3 技术路线 | 第54页 |
3.4 材料与方法 | 第54-55页 |
3.5 实验结果与分析 | 第55-68页 |
3.5.1 实验设计 | 第55页 |
3.5.2 构建minigene | 第55-56页 |
3.5.3 通过大片段删除实验寻找锚定位点前内含子序列中的保守元件 | 第56-58页 |
3.5.4 锚定位点前面内含子可以形成特殊的六叶形二级结构 | 第58-60页 |
3.5.5 内含子中这六个茎环结构的删除会明显降低剪接效率 | 第60-61页 |
3.5.6 单个内含子茎环结构可以部分取代整体六个茎环结构的作用 | 第61-63页 |
3.5.7 这种六个茎环结构组成增强子的形式在果蝇物种中是保守的 | 第63-66页 |
3.5.8 在其他昆虫物种中也存在相似的结构 | 第66-68页 |
3.5.9 在昆虫纲以外的甲壳纲物种水蚤中也存在相似的结构并通过实验证实 | 第68页 |
3.6 讨论 | 第68-73页 |
3.6.1 果蝇Dscam基因外显子5、6之间内含子分段删除实验证实该800bp片段内存在特异调节该基因外显子6互斥可变剪接机制的元件 | 第69-70页 |
3.6.2 果蝇Dscam基因外显子5、6之间内含子可形成保守的有六个茎环结构的RNA二级结构 | 第70页 |
3.6.3 果蝇Dscam基因外显子5、6之间内含子形成的保守二级结构的每一个茎环结构都单独具备增强子的功能 | 第70-71页 |
3.6.4 其它物种Dscam基因外显子5、6之间的内含子也存在类似的六个茎环结构组成的RNA二级结构 | 第71-73页 |
第4章 RNA结合蛋白与特异RNA序列的互作研究 | 第73-90页 |
4.1 序言 | 第73-74页 |
4.2 技术路线 | 第74页 |
4.3 材料与方法 | 第74-81页 |
4.3.1 材料与试剂 | 第74-78页 |
4.3.2 实验方法 | 第78-81页 |
4.4 实验结果与分析 | 第81-86页 |
4.4.1 RNA结合蛋白的原核表达 | 第81-82页 |
4.4.2 原核表达蛋白的纯化 | 第82-83页 |
4.4.3 目标RNA的制备 | 第83-84页 |
4.4.4 EMSA实验验RNA结合蛋白与目标RNA的结合能力 | 第84-86页 |
4.5 讨论 | 第86-90页 |
4.5.1 RNA结合蛋白的成功表达和纯化 | 第87-88页 |
4.5.2 EMSA实验——果蝇14-3-3ζ基因互斥外显子和内含子特定序列和果蝇Dscam基因外显子6的类增强子序列与RNA结合蛋白的亲和力分析 | 第88-90页 |
第5章 展望 | 第90-91页 |
博士在读期间的学术成绩 | 第91-92页 |
参考文献 | 第92-104页 |