| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-28页 |
| 1.1 绿色荧光蛋白（GFP）概述 | 第11-18页 |
| 1.1.1 绿色荧光蛋白的起源及发展 | 第11页 |
| 1.1.2 绿色荧光蛋白的结构及性质 | 第11-15页 |
| 1.1.3 绿色荧光蛋白的应用 | 第15-18页 |
| 1.2 双分子荧光互补技术（BIFC）概述 | 第18-26页 |
| 1.2.1 双分子荧光互补技术原理 | 第18-19页 |
| 1.2.2 双分子荧光互补技术缘起 | 第19-20页 |
| 1.2.3 双分子荧光互补技术发展 | 第20-22页 |
| 1.2.4 双分子荧光互补技术应用 | 第22-25页 |
| 1.2.5 双分子荧光互补技术的优缺点 | 第25-26页 |
| 1.3 本文构思 | 第26-28页 |
| 第2章 基于重组绿色荧光蛋白和镍-氮三乙酸修饰磁性纳米颗粒的凝血酶无标记荧光分析方法 | 第28-38页 |
| 2.1 前言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验部分 | 第29-31页 |
| 2.2.1 实验仪器与试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.2 加强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达和纯化 | 第30页 |
| 2.2.3 凝血酶活性及其抑制剂的检测 | 第30页 |
| 2.2.4 在实际样品中检测凝血酶活性 | 第30页 |
| 2.2.5 Ni2+-NTA MNPs 的可重复利用性验证 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-36页 |
| 2.3.1 基于 EGFP 和 Ni2+-NTA MNPs 的凝血酶活性检测方法的设计原理及验证 | 第31-32页 |
| 2.3.2 凝血酶活性检测 | 第32-34页 |
| 2.3.3 凝血酶抑制剂的检测 | 第34-35页 |
| 2.3.4 实际样品中凝血酶活性检测 | 第35-36页 |
| 2.3.5 Ni2+-NTA MNPs 的可重复使用性 | 第36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-38页 |
| 第3章 三种 1+10 自组装双分子荧光互补对中大片段获得方法的比较 | 第38-47页 |
| 3.1 前言 | 第38-39页 |
| 3.2 实验部分 | 第39-41页 |
| 3.2.1 实验仪器与试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.2 大肠杆菌中表达并纯化完整绿色荧光蛋白 | 第40页 |
| 3.2.3 完整绿色荧光蛋白的酶切 | 第40页 |
| 3.2.4 用盐酸胍变性分离绿色荧光蛋白大小片段并复性 | 第40页 |
| 3.2.5 用 SDS 变性分离绿色荧光蛋白大小片段并复性 | 第40页 |
| 3.2.6 用尿素变性分离绿色荧光蛋白大小片段并复性 | 第40-41页 |
| 3.2.7 蛋白浓度测定及 truncated GFP 与 S10 片段复合 | 第41页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第41-46页 |
| 3.3.1 1+10 自组装双分子荧光互补对构建原理 | 第41页 |
| 3.3.2 酶切条件优化 | 第41-42页 |
| 3.3.3 三种变性分离方法的评价 | 第42-46页 |
| 3.3.4 三种变性分离方法的比较 | 第46页 |
| 3.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 第4章 基于绿色荧光蛋白自组装双分子荧光互补技术的蛋白激酶无标记荧光分析方法 | 第47-55页 |
| 4.1 前言 | 第47-48页 |
| 4.2 实验部分 | 第48-49页 |
| 4.2.1 实验试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 4.2.2 大肠杆菌中表达并纯化完整绿色荧光蛋白 | 第49页 |
| 4.2.3 完整绿色荧光蛋白的酶切 | 第49页 |
| 4.2.4 用尿素变性分离绿色荧光蛋白大小片段并复性 | 第49页 |
| 4.2.5 蛋白浓度测定及大小片段复合验证 | 第49页 |
| 4.2.6 PKA 活性检测 | 第49页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第49-54页 |
| 4.3.1 自组装双分子荧光互补对的构建及 S10 的检测 | 第49-51页 |
| 4.3.2 自组装双分子荧光互补对检测蛋白激酶活性的原理及论证 | 第51-52页 |
| 4.3.3 PKA 活性检测 | 第52-54页 |
| 4.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-69页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
