| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| 1.1 植物病原真菌中的 MAPK 信号途径 | 第10页 |
| 1.2 植物病原真菌 HOG-MAPK 级联途径及其功能 | 第10-11页 |
| 1.3 酵母中的 HOG-MAPK 级联途径及其与水甘油通道蛋白 Fps1 的调控关系 | 第11-12页 |
| 1.4 植物病原真菌中水甘油通道蛋白的研究现状 | 第12-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-28页 |
| 2.1 菌株和载体质粒 | 第13页 |
| 2.2 供试培养基 | 第13页 |
| 2.3 供试试剂的配制 | 第13-15页 |
| 2.3.1 供试试剂 | 第13-14页 |
| 2.3.2 主要试剂的配制 | 第14-15页 |
| 2.4 主要仪器 | 第15页 |
| 2.5 玉米大斑病菌 StFPS1 的克隆及生物信息学分析 | 第15-19页 |
| 2.5.1 水通道蛋白基因的查询及生物信息学分析 | 第15-16页 |
| 2.5.2 玉米大斑病菌基因组 DNA 的提取 | 第16页 |
| 2.5.3 用于 StFPS1 基因敲除载体构建的基因片段的 PCR 扩增 | 第16页 |
| 2.5.4 PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第16页 |
| 2.5.5 PCR 扩增产物的克隆测序 | 第16-17页 |
| 2.5.6 碱裂解法小量提取大肠杆菌质粒 | 第17-18页 |
| 2.5.7 StFPS1 基因片段与基因敲除载体的拼接 | 第18-19页 |
| 2.5.8 重组载体 PP-A-B 的 PCR 验证 | 第19页 |
| 2.5.9 重组载体 PP-A-B 的酶切验证 | 第19页 |
| 2.6 玉米大斑病菌 StFPS1 基因敲除突变体的创制 | 第19-20页 |
| 2.6.1 原生质体的制备与纯化 | 第19页 |
| 2.6.2 原生质体的转化与再生 | 第19-20页 |
| 2.6.3 突变体的抗性筛选 | 第20页 |
| 2.7 玉米大斑病菌 StFPS1 基因缺失突变体的验证 | 第20-23页 |
| 2.7.1 突变体的 PCR 验证 | 第20-21页 |
| 2.7.2 突变体的 Southern blotting 验证 | 第21-22页 |
| 2.7.3 突变体的 RT-PCR 验证 | 第22-23页 |
| 2.8 玉米大斑病菌 StFPS1 基因敲除突变体的分析 | 第23-28页 |
| 2.8.1 StFPS1 基因敲除突变体生长速率的测定 | 第23-24页 |
| 2.8.2 StFPS1 基因敲除突变体菌落形态的观察 | 第24页 |
| 2.8.3 StFPS1 基因敲除突变体菌丝形态的光学显微观察 | 第24页 |
| 2.8.4 StFPS1 基因敲除突变体菌株△StFPS1 分生孢子产量的统计 | 第24页 |
| 2.8.5 StFPS1 基因敲除突变体对高渗胁迫的应激反应 | 第24页 |
| 2.8.6 玉米大斑病菌胞内甘油含量的测定 | 第24-25页 |
| 2.8.7 StFPS1 基因敲除突变体甘油合成基因 StGPD1 的表达量分析 | 第25页 |
| 2.8.8 StFPS1 基因敲除突变体菌丝对 SDS 的敏感性测定 | 第25页 |
| 2.8.9 StFPS1 基因敲除突变体菌丝发育的电子显微观察 | 第25-26页 |
| 2.8.10 StFPS1 基因敲除突变体 HT-粗毒素含量的测定 | 第26页 |
| 2.8.11 StFPS1 基因敲除突变体侵染能力的测定 | 第26页 |
| 2.8.12 StFPS1 基因敲除突变体胞壁降解酶活性的测定 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-44页 |
| 3.1 玉米大斑病菌水甘油通道蛋白基因 StFPS1 的生物信息学分析 | 第28-31页 |
| 3.2 玉米大斑病菌水甘油通道蛋白 StFPS1 基因敲除载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.1 StFPS1 基因同源臂的扩增 | 第31页 |
| 3.2.2 StFPS1 基因敲除载体的酶切验证 | 第31-32页 |
| 3.3 玉米大斑病菌水甘油通道蛋白 StFPS1 基因敲除突变体的获得 | 第32-34页 |
| 3.3.1 转化子的抗性筛选 | 第32页 |
| 3.3.2 转化子的特异引物 PCR 验证 | 第32-33页 |
| 3.3.3 转化子的 RT-PCR 验证 | 第33页 |
| 3.3.4 转化子的 Southern blotting 验证 | 第33-34页 |
| 3.4 玉米大斑病菌 StFPS1 基因参与调控病菌菌丝的发育 | 第34-36页 |
| 3.4.1 StFPS1 基因对病菌菌落形态的影响 | 第34页 |
| 3.4.2 StFPS1 基因对菌落的生长速率的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.3 玉米大斑病菌 StFPS1 基因对病菌菌丝形态的影响 | 第35-36页 |
| 3.5 玉米大斑病菌 StFPS1 基因调控病菌分生孢子的发育 | 第36页 |
| 3.6 玉米大斑病菌 StFPS1 基因参与调控病菌细胞壁的发育 | 第36-38页 |
| 3.6.1 StFPS1 基因敲除突变体对 SDS 的敏感性增强 | 第36-37页 |
| 3.6.2 StFPS1 基因敲除突变体的菌丝细胞壁结构发生明显改变 | 第37-38页 |
| 3.7 玉米大斑病菌 StFPS1 基因参与调控病菌的高渗胁迫反应 | 第38-41页 |
| 3.7.1 StFPS1 基因敲除突变体在不同高渗胁迫下的菌落形态 | 第38-39页 |
| 3.7.2 StFPS1 基因敲除突变体在不同高渗胁迫下菌落的生长速率测定 | 第39-40页 |
| 3.7.3 StFPS1 基因敲除突变体在高渗胁迫下的菌丝形态观察 | 第40页 |
| 3.7.4 StFPS1 基因敲除突变体胞内甘油含量的变化 | 第40-41页 |
| 3.7.5 StFPS1 基因敲除突变体甘油合成基因的表达分析 | 第41页 |
| 3.8 玉米大斑病菌 StFPS1 基因不参与调控病菌 HT-毒素的活性 | 第41-43页 |
| 3.8.1 StFPS1 基因敲除突变体 HT-毒素活性的测定 | 第41-42页 |
| 3.8.2 StFPS1 基因敲除突变体 HT-粗毒素组分的 HPLC 分析 | 第42-43页 |
| 3.9 玉米大斑病菌 StFPS1 基因也不参与调控病菌的侵染能力和细胞壁降解酶活性 | 第43-44页 |
| 3.9.1 StFPS1 基因敲除突变体侵染能力的观察 | 第43页 |
| 3.9.2 StFPS1 基因敲除突变体中胞壁降解酶活性的测定 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 基因敲除技术与提高丝状真菌同源重组率的途径 | 第44页 |
| 4.2 水甘油通道蛋白基因 StFPS1 参与玉米大斑病菌高渗胁迫反应的机制 | 第44-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
