| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒概述 | 第13-15页 |
| 1.1.2 PRRSV逃逸宿主体液免疫应答的机制 | 第15-16页 |
| 1.1.3 PRRSV疫苗研究进展 | 第16-18页 |
| 1.1.4 PRRSV非结构蛋白Nsp9/ RdRp | 第18页 |
| 1.2 纳米抗体研究进展 | 第18-25页 |
| 1.2.1 纳米抗体的结构特征 | 第19-20页 |
| 1.2.2 纳米抗体的特性及应用 | 第20-23页 |
| 1.2.3 纳米抗体在抗病毒研究中的应用 | 第23-25页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第25-27页 |
| 第二章 PRRSV Nsp9蛋白的表达与纯化 | 第27-43页 |
| 2.1 材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和实验动物 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂耗材 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第28-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 Nsp9基因的扩增及原核表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.2 Nsp9重组蛋白在大肠杆菌中的表达与可溶性分析 | 第32-34页 |
| 2.2.3 Nsp9重组蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.4 Nsp9抗血清的制备 | 第35-36页 |
| 2.3 结果 | 第36-40页 |
| 2.3.1 pET-28a-Nsp9原核表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.3.2 Nsp9重组蛋白在大肠杆菌中的表达与可溶性分析 | 第38-39页 |
| 2.3.3 Nsp9重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| 2.3.4 Nsp9抗血清制备 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 PRRSV Nsp9特异性纳米抗体的筛选和鉴定 | 第43-63页 |
| 3.1 材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 质粒、菌株、和实验动物 | 第43页 |
| 3.1.2 主要试剂耗材 | 第43-44页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第44页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第44-45页 |
| 3.2 方法 | 第45-56页 |
| 3.2.1 鼠抗骆驼IgG抗血清的制备 | 第45-46页 |
| 3.2.2 双峰驼免疫 | 第46-47页 |
| 3.2.3 VHH噬菌体抗体文库的构建 | 第47-52页 |
| 3.2.4 Nsp9特异性纳米抗体的淘选 | 第52-56页 |
| 3.2.5 Nsp9特异性纳米抗体的鉴定 | 第56页 |
| 3.3 结果 | 第56-61页 |
| 3.3.1 骆驼IgG的纯化及抗血清的制备 | 第56-57页 |
| 3.3.2 双峰驼免疫 | 第57页 |
| 3.3.3 VHH噬菌体抗体文库的构建 | 第57-58页 |
| 3.3.4 Nsp9特异性纳米抗体的筛选 | 第58-60页 |
| 3.3.5 Nsp9特异性纳米抗体的鉴定 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-62页 |
| 3.5 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 胞内纳米抗体活性的检测及稳定表达纳米抗体MARC-145细胞系的建立 | 第63-77页 |
| 4.1 材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 质粒和细胞 | 第63页 |
| 4.1.2 主要试剂耗材 | 第63-64页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第64页 |
| 4.1.4 主要试剂配制 | 第64页 |
| 4.2 方法 | 第64-70页 |
| 4.2.1 载体构建 | 第64-68页 |
| 4.2.2 胞内纳米抗体活性的检测 | 第68-69页 |
| 4.2.3 稳定表达纳米抗体MARC-145细胞系的建立 | 第69-70页 |
| 4.2.4 稳定表达纳米抗体MARC-145细胞系的鉴定 | 第70页 |
| 4.3 结果 | 第70-74页 |
| 4.3.1 真核表达载体的构建 | 第70-72页 |
| 4.3.2 胞内纳米抗体与Nsp9的相互作用 | 第72-73页 |
| 4.3.3 稳定表达纳米抗体MARC-145细胞系的建立及鉴定 | 第73-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-75页 |
| 4.5 小结 | 第75-77页 |
| 第五章 PRRSV Nsp9蛋白纳米抗体抗病毒功能研究 | 第77-89页 |
| 5.1 材料 | 第77-78页 |
| 5.1.1 细胞和病毒 | 第77页 |
| 5.1.2 主要试剂耗材 | 第77页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第77-78页 |
| 5.1.4 主要试剂配制 | 第78页 |
| 5.2 方法 | 第78-82页 |
| 5.2.1 胞内纳米抗体对PRRSV SD16毒株复制的影响 | 第78-79页 |
| 5.2.2 胞内表达的Nb6对不同接毒量SD16的抑制作用 | 第79-80页 |
| 5.2.3 胞内表达的Nb6对不同PRRSV毒株复制的影响 | 第80页 |
| 5.2.4 胞内表达的Nb6与PRRSV自身编码的Nsp9蛋白的相互作用 | 第80-81页 |
| 5.2.5 胞内表达的Nb6对PRRSV吸附及基因复制和转录的影响 | 第81-82页 |
| 5.3 结果 | 第82-86页 |
| 5.3.1 胞内纳米抗体对PRRSV SD16毒株复制的影响 | 第82-83页 |
| 5.3.2 胞内表达的Nb6对不同接毒量SD16的抑制作用 | 第83-84页 |
| 5.3.3 胞内表达的Nb6对不同PRRSV毒株复制的影响 | 第84-85页 |
| 5.3.4 胞内表达的Nb6与PRRSV自身编码的Nsp9蛋白的相互作用 | 第85页 |
| 5.3.5 胞内表达的Nb6对PRRSV基因复制和转录的影响 | 第85-86页 |
| 5.4 讨论 | 第86-87页 |
| 5.5 小结 | 第87-89页 |
| 全文总结 | 第89-91页 |
| 本研究创新点和下一步研究方向 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 作者简介 | 第107-108页 |
