| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·细胞色素P450 芳香化酶 | 第12-15页 |
| ·细胞色素P450 芳香化酶概述 | 第12-13页 |
| ·cyp19a1 基因在硬骨鱼类中的分布 | 第13-14页 |
| ·cyp19a1 基因5’侧翼的启动子分析 | 第14页 |
| ·cyp19a1 基因的功能 | 第14-15页 |
| ·内分泌干扰物的危害及其与芳香化酶的关系 | 第15-19页 |
| ·内分泌干扰物的概述 | 第15页 |
| ·内分泌干扰物的危害 | 第15-16页 |
| ·EDCs 的生物标志物 | 第16页 |
| ·EDCs 与芳香化酶的关系 | 第16-17页 |
| ·本试验用到的内分泌干扰物 | 第17-19页 |
| ·实验材料的选择 | 第19-20页 |
| ·鱼类作为内分泌干扰实验材料的优点 | 第19-20页 |
| ·稀有鮈鲫的特性 | 第20页 |
| ·选题的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 稀有鮈鲫P450 芳香化酶基因cDNA 全长的克隆及组织特异性表达 | 第22-44页 |
| ·材料与方法 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·载体和菌株 | 第22页 |
| ·组织样品 | 第22-23页 |
| ·主要溶液配制 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-29页 |
| ·总RNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·中间片段的克隆 | 第24-25页 |
| ·RACE 方法克隆cyp19a1 基因cDNA 的两端序列 | 第25-27页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·菌落PCR | 第28页 |
| ·阳性克隆cDNA 片断测序及序列分析 | 第28-29页 |
| ·cyp19a1 基因的组织表达 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-41页 |
| ·组织中总RNA 的提取及检测 | 第29页 |
| ·稀有鮈鲫cyp19a1 基因的克隆 | 第29-32页 |
| ·稀有鮈鲫cyp19a1 基因全长cDNA 的序列分析 | 第32-41页 |
| ·稀有鮈鲫的组织特异性表达 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·cyp19a1 基因的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| ·cyp19a1 基因的组织分布及检测方法 | 第42页 |
| ·cyp19a1 在脑中的分布及表达 | 第42页 |
| ·cyp19a1 基因的功能 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第三章 稀有鮈鲫 cyp19a1a 和 cyp19a1b 基因启动子的分离 | 第44-53页 |
| ·材料与方法 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·组织样品 | 第44页 |
| ·主要溶液配制 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·DNA 提取 | 第44-45页 |
| ·引物设计与合成 | 第45页 |
| ·Genome walking 扩增5’侧翼启动子序列 | 第45-46页 |
| ·启动子序列分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-50页 |
| ·DNA 提取 | 第46-47页 |
| ·Genomewalker 文库的构建 | 第47-48页 |
| ·cyp19a1 基因的5’侧翼序列的分析 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·硬骨鱼类cyp19a1 的转录因子结合位点 | 第50-51页 |
| ·转录元件与cyp19a1 功能的关系 | 第51页 |
| ·AhR 和ER 的交叉作用 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 EDCs暴露对稀有鮈鲫幼鱼cyp19a1基因表达的影响 | 第53-58页 |
| ·材料与方法 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·组织样品 | 第53页 |
| ·主要溶液配制 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·EDCs 暴露 | 第53页 |
| ·RNA 提取及反转录 | 第53-54页 |
| ·Real-time PCR | 第54页 |
| ·数据处理 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-55页 |
| ·EDCs 对cyp19a1a 基因mRNA 的影响 | 第54页 |
| ·EDCs 对 cyp19a1b 基因 mRNA 的影响 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·EDCs 的研究方法及受试动物的选用 | 第55-56页 |
| ·EE2 对稀有鮈鲫的cyp19a1 表达的影响 | 第56页 |
| ·NP 对稀有鮈鲫的cyp19a1 表达的影响 | 第56页 |
| ·BPA 对稀有鮈鲫的cyp19a1 表达的影响 | 第56-57页 |
| ·Clofibrate 对稀有鮈鲫的cyp19a1 表达的影响 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| ·主要结论 | 第58页 |
| ·本研究的创新点 | 第58页 |
| ·进一步研究内容 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 缩略词 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
