| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 导言 | 第14-22页 |
| 参考文献 | 第17-22页 |
| 第一章 OBA对LPS活化RAW264.7细胞分泌促炎介质的影响 | 第22-40页 |
| 1.1 引言 | 第22页 |
| 1.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 1.2.1 主要仪器 | 第22页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 1.2.3 试剂配制 | 第23-25页 |
| 1.2.4 细胞株 | 第25页 |
| 1.3 实验方法 | 第25-32页 |
| 1.3.1 MTT法测24h细胞毒 | 第25-26页 |
| 1.3.2 NaNO_2标准曲线 | 第26页 |
| 1.3.3 Griess法测NO_2~- | 第26页 |
| 1.3.4 NO自由基测定 | 第26-27页 |
| 1.3.5 iNOS活性测定 | 第27页 |
| 1.3.6 Western blot法测iNOS蛋白 | 第27-30页 |
| 1.3.7 ELISA法测IL-6、IL-1β、MCP-1 | 第30-31页 |
| 1.3.8 统计学分析 | 第31-32页 |
| 1.4 结果 | 第32-37页 |
| 1.4.1 OBA对RAW264.7细胞24h细胞毒作用 | 第32页 |
| 1.4.2 NaNO_2标准曲线 | 第32-33页 |
| 1.4.3 OBA可减少LPS诱导的RAW264.7细胞上清NO含量 | 第33-34页 |
| 1.4.4 OBA对硝普钠释放NO自由基无影响 | 第34页 |
| 1.4.5 OBA对RAW264.7细胞iNOS活性无影响 | 第34-35页 |
| 1.4.6 OBA可降低LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS蛋白水平 | 第35页 |
| 1.4.7 OBA可降低LPS活化的RAW264.7细胞IL-6、IL-1β、MCP-1 | 第35-37页 |
| 1.5 讨论 | 第37-38页 |
| 1.6 参考文献 | 第38-40页 |
| 第二章 OBA对LPS活化的RAW264.7细胞促炎介质转录水平的影响 | 第40-47页 |
| 2.1 引言 | 第40页 |
| 2.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第40页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第40页 |
| 2.2.3 试剂配制 | 第40-41页 |
| 2.2.4 细胞株 | 第41页 |
| 2.3 实验方法 | 第41-44页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第41页 |
| 2.3.2 Real Time(RT-PCR)法测炎症介质mRNA | 第41-44页 |
| 2.3.3 统计学分析 | 第44页 |
| 2.4 结果 | 第44-45页 |
| 2.4.1 OBA可降低LPS活化的RAW264.7细胞iNOS、IL-1β、IL-6、MCP-1mRNA水平 | 第44-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45-46页 |
| 2.6 参考文献 | 第46-47页 |
| 第三章 OBA对NF-κB和AP-1/MAPK信号通路的影响 | 第47-55页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第47-48页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第48页 |
| 3.2.3 细胞株 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第48-49页 |
| 3.3.2 化学发光法测AP-1和NF-κB激活 | 第49页 |
| 3.3.3 Western Blot法测p38、JNK、ERK1/2磷酸化水平 | 第49页 |
| 3.3.4 Western Blot测定p65蛋白 | 第49-50页 |
| 3.3.5 统计学分析 | 第50页 |
| 3.4 结果 | 第50-52页 |
| 3.4.1 OBA可抑制LPS诱导的AP-1激活 | 第50-51页 |
| 3.4.2 OBA可抑制LPS诱导的p38磷酸化水平 | 第51-52页 |
| 3.4.3 OBA对LPS诱导的p65核转位无明显影响 | 第52页 |
| 3.5 讨论 | 第52-53页 |
| 3.6 参考文献 | 第53-55页 |
| 第四章 OBA对LPS活化的RAW264.7细胞MKP-1的影响 | 第55-62页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第55页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第55-56页 |
| 4.2.3 实验溶液的配制 | 第56页 |
| 4.2.4 细胞株 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-57页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第56页 |
| 4.3.2 Western blot法测定MKP-1蛋白 | 第56-57页 |
| 4.3.3 RT-PCR法测定MKP-1 mRNA | 第57页 |
| 4.4 结果 | 第57-58页 |
| 4.4.1 OBA可增加LPS活化的RAW264.7细胞MKP-1蛋白表达 | 第57-58页 |
| 4.4.2 OBA可增加LPS活化的RAW264.7细胞MKP-1 mRNA水平 | 第58页 |
| 4.5 讨论 | 第58-60页 |
| 4.6 参考文献 | 第60-62页 |
| 第五章 靶向抑制MIF是OBA抗炎的主要机制 | 第62-81页 |
| 5.1 计算机模拟OBA寻靶研究 | 第62-69页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第62页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第62-63页 |
| 5.1.2.1 使用Seaware靶点预测软件为OBA的寻靶 | 第62页 |
| 5.1.2.2 OBA与MIF相互作用的研究 | 第62-63页 |
| 5.1.3 实验结果 | 第63-66页 |
| 5.1.3.1 Seaware软件预测OBA作用靶点为MIF | 第63页 |
| 5.1.3.2 OBA对接到315t的活性口袋中 | 第63-66页 |
| 5.1.4 讨论 | 第66-67页 |
| 5.1.5 参考文献 | 第67-69页 |
| 5.2 OBA对MIF抑制作用研究 | 第69-74页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 5.2.1.1 主要仪器 | 第69页 |
| 5.2.1.2 主要试剂 | 第69页 |
| 5.2.1.3 试剂配制 | 第69-70页 |
| 5.2.1.4 细胞株 | 第70页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第70-71页 |
| 5.2.2.1 细胞计数法测细胞趋化 | 第70页 |
| 5.2.2.2 酶反应法测定MIF活性 | 第70-71页 |
| 5.2.2.3 统计学分析 | 第71页 |
| 5.2.3 实验结果 | 第71-72页 |
| 5.2.3.1 OBA可抑制MIF诱导的RAW264.7细胞趋化作用 | 第71页 |
| 5.2.3.2 OBA可抑制MIF活性 | 第71-72页 |
| 5.2.4 讨论 | 第72-73页 |
| 5.2.5 参考文献 | 第73-74页 |
| 5.3 MIF(-)细胞对LPS反应及OBA的作用 | 第74-81页 |
| 5.3.1 实验材料 | 第74-75页 |
| 5.3.1.1 主要仪器 | 第74页 |
| 5.3.1.2 主要试剂 | 第74-75页 |
| 5.3.1.3 试剂配制 | 第75页 |
| 5.3.1.4 细胞株 | 第75页 |
| 5.3.2 实验方法 | 第75-77页 |
| 5.3.2.1 细胞培养 | 第75-76页 |
| 5.3.2.2 制备MIF(-)细胞 | 第76-77页 |
| 5.3.2.3 Western Blot法验证MIF(-)细胞 | 第77页 |
| 5.3.2.4 Griess法测NO_2~- | 第77页 |
| 5.3.2.5 ELISA法测IL-6、MCP-1 | 第77页 |
| 5.3.2.6 统计学分析 | 第77页 |
| 5.3.3 结果 | 第77-79页 |
| 5.3.3.1 Western blot验证MIF(-)细胞 | 第77-78页 |
| 5.3.3.2 MIF(-)细胞上清NO、IL-6、MCP-1对LPS的反应性降低 | 第78-79页 |
| 5.3.3.3 OBA对LPS诱导MIF (-)细胞炎症介质无明显作用 | 第79页 |
| 5.3.4 讨论 | 第79-80页 |
| 5.3.5 参考文献 | 第80-81页 |
| 第六章 讨论与总结 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 公开发表论文 | 第90-91页 |
| 个人简历 | 第91-94页 |
