| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.1 精子变形期间转录本存在巨大差异 | 第12页 |
| 1.2 活力不同精子间转录本差异较大 | 第12-13页 |
| 1.3 获能前后精子转录本发生了较大差异 | 第13-14页 |
| 1.4 精子冷冻前后转录本产生较大差异 | 第14页 |
| 1.5 冰冻切片技术 | 第14-15页 |
| 1.6 激光显微切割技术 | 第15-16页 |
| 1.7 转录组测序技术 | 第16-17页 |
| 1.8 展望 | 第17页 |
| 1.9 本研究的目的、意义与研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 试验材料与方法 | 第18-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器设备与试剂耗材 | 第18-19页 |
| 2.1.2.1 主要试验仪器设备及厂商 | 第18页 |
| 2.1.2.2 主要试剂及购买公司 | 第18-19页 |
| 2.1.2.3 试验耗材 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试验试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.2 技术路线 | 第20-21页 |
| 2.3 试验方法 | 第21-30页 |
| 2.3.1 样品的采集 | 第21-23页 |
| 2.3.1.1 睾丸及附睾的采集 | 第21页 |
| 2.3.1.2 附睾尾精子的采集及活力检测 | 第21-22页 |
| 2.3.1.3 圆形、长形精子细胞及精原干细胞的获取 | 第22-23页 |
| 2.3.2 总RNA制备 | 第23-25页 |
| 2.3.2.1 精子总RNA制备 | 第23-25页 |
| 2.3.2.2 圆形、长形精子细胞及精原干细胞RNA提 | 第25页 |
| 2.3.2.3 睾丸组织RNA提取 | 第25页 |
| 2.3.3 总RNA质量评估 | 第25-28页 |
| 2.3.3.1 总RNA浓度、OD值得测定 | 第25页 |
| 2.3.3.2 总RNA基因组、体细胞去除效果检测 | 第25-28页 |
| 2.3.4 统计分析 | 第28页 |
| 2.3.5 cDNA扩增及质量检测 | 第28-30页 |
| 2.3.5.1 反转录 | 第28页 |
| 2.3.5.2 PCR预扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.5.3 cDNA质量检测 | 第29-30页 |
| 第三章 试验结果与分析 | 第30-43页 |
| 3.1 样品的采集 | 第30-33页 |
| 3.1.1 附睾尾精子采集及活力检测 | 第30页 |
| 3.1.2 圆形、长形精子细胞及精原干细胞的获取 | 第30-33页 |
| 3.2 RNA质量检测 | 第33-37页 |
| 3.2.1 三种方法提取的精子RNA质量检测 | 第33-34页 |
| 3.2.1.1 精子RNA浓度及OD值检测 | 第33页 |
| 3.2.1.2 凝胶电泳检测 | 第33-34页 |
| 3.2.2 各样品总RNA制备效果检测 | 第34-37页 |
| 3.2.2.1 各样品总RNA浓度及OD值检测 | 第34页 |
| 3.2.2.2 单个生精细胞RNA含量 | 第34-35页 |
| 3.2.2.3 总RNA凝胶电泳检测结果 | 第35页 |
| 3.2.2.4 基因组DNA去除效果检测 | 第35-36页 |
| 3.2.2.5 体细胞去除效果检测 | 第36-37页 |
| 3.3 生精细胞的RNA含量 | 第37页 |
| 3.4 CDNA扩增质量检测 | 第37-43页 |
| 3.4.1 cDNA浓度检测 | 第37-38页 |
| 3.4.2 cDNA完整性检测 | 第38-43页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第43-47页 |
| 4.1 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1.1 关于冰冻切片制作 | 第43-44页 |
| 4.1.2 关于切片染色 | 第44页 |
| 4.1.3 关于激光显微切割技术 | 第44页 |
| 4.1.4 关于精子RNA提取方法 | 第44-45页 |
| 4.1.5 关于生精细胞总RNA凝胶电泳检测 | 第45页 |
| 4.1.6 关于基因组和体细胞污染检测 | 第45页 |
| 4.1.7 关于生精细胞RNA含量分析 | 第45-46页 |
| 4.1.8 关于cDNA扩增 | 第46页 |
| 4.2 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简历 | 第54页 |
