中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第一章 文献综述 | 第12-25页 |
1 核盘菌简介 | 第12-17页 |
1.1 核盘菌的分类,生活史及其侵染循环 | 第13-15页 |
1.2 菌核病病害症状 | 第15-16页 |
1.3 菌核病的危害及防治 | 第16-17页 |
2 核盘菌菌核发育 | 第17-20页 |
2.1 影响核盘菌菌核发育的因素 | 第18-20页 |
3 丝状真菌基因功能研究进展 | 第20-23页 |
3.1 RNA干扰技术 | 第20-22页 |
3.2 转座子标签技术 | 第22页 |
3.3 超表达技术 | 第22页 |
3.4 基因敲除 | 第22-23页 |
4 Forkhead-box转录因子研究进展 | 第23-24页 |
5 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
第二章 核盘菌Ss-Fkh1基因克隆及RNA干扰载体的构建 | 第25-37页 |
1 材料 | 第25-26页 |
1.1 菌株及载体 | 第25页 |
1.2 主要仪器 | 第25页 |
1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
1.4 培养基配制及试剂配制 | 第26页 |
2 方法 | 第26-33页 |
2.1 Ss-Fkh1基因克隆 | 第26-31页 |
2.2 Ss-Fkh1 RNA干扰载体的构建 | 第31-33页 |
2.3 Ss-Fkh1 RNA干扰载体的验证 | 第33页 |
3 结果与分析 | 第33-35页 |
3.1 PCR克隆连入两种载体的Ss-Fkh1片段 | 第33-34页 |
3.2 重组质粒酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
4 小结 | 第35-37页 |
第三章 筛选核盘菌Ss-Fkh1遗传转化子 | 第37-48页 |
1 材料 | 第37-38页 |
1.1 载体及菌株 | 第37页 |
1.2 主要试剂 | 第37页 |
1.3 主要试剂的配制 | 第37-38页 |
2 方法 | 第38-43页 |
2.1 制备核盘菌菌丝的原生质体 | 第38-40页 |
2.2 PEG-Ca Cl2介导核盘菌原生质体的遗传转化 | 第40页 |
2.3 2xCTAB提取液配制: | 第40页 |
2.4 pSD-Ss-Fkh1、p S1-Ss-Fkh1, 沉默转化子的筛选 | 第40-41页 |
2.5 转化子PCR检测 | 第41-43页 |
3 结果与分析 | 第43-47页 |
3.1 菌丝培养 | 第43-44页 |
3.2 原生质体制备 | 第44页 |
3.3 转化子PCR初步检测 | 第44-47页 |
4.小结 | 第47-48页 |
第四章 转录因子Ss-Fkh1的功能验证 | 第48-65页 |
1 材料 | 第48-49页 |
1.1 菌株 | 第48页 |
1.2 主要试剂 | 第48页 |
1.3 试剂配制 | 第48-49页 |
2 方法 | 第49-53页 |
2.1 野生型核盘菌中Ss-Fkh1表达量分析 | 第49页 |
2.2 沉默转化子菌丝形态观察 | 第49页 |
2.3 沉默转化子菌落形态观察 | 第49页 |
2.4 沉默转化子菌丝生长速率测定 | 第49-50页 |
2.5 野生型核盘菌与沉默转化子对峙培养 | 第50页 |
2.6 黑色素相关基因表达量分析 | 第50-51页 |
2.7 沉默转化子致病力的测定 | 第51-52页 |
2.8 沉默转化子对过氧化氢耐力测定 | 第52页 |
2.9 沉默转化子对高盐环境的耐力测定 | 第52-53页 |
3 结果与分析 | 第53-63页 |
3.1 野生型核盘菌中Ss-Fkh1表达量分析 | 第53页 |
3.2 沉默转化子菌丝形态观察 | 第53-54页 |
3.3 沉默转化子菌落形态观察结果 | 第54-55页 |
3.4 沉默转化子菌丝生长速率测定 | 第55-56页 |
3.5 野生型核盘菌与沉默转化子对峙培养 | 第56-57页 |
3.6 黑色素相关基因表达量分析 | 第57-59页 |
3.7 沉默转化子致病力的测定 | 第59-60页 |
3.8 沉默转化子对过氧化氢耐力测定 | 第60-62页 |
3.9 沉默转化子对高盐环境的耐力测定 | 第62-63页 |
4 小结 | 第63-65页 |
结论 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-71页 |
致谢 | 第71-72页 |