| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第14-17页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-50页 |
| 综述一 诱导多能干细胞研究进展 | 第18-43页 |
| 1. 体细胞核重编程的方法 | 第18-23页 |
| 1.1 体细胞核移植 | 第19-20页 |
| 1.2 细胞融合 | 第20-21页 |
| 1.3 转录因子转导 | 第21-22页 |
| 1.4 体细胞核重编程方法的比较 | 第22-23页 |
| 2. 诱导多能干细胞的起源 | 第23-24页 |
| 3. 诱导多能干细胞的转录因子 | 第24-28页 |
| 3.1 Oct4 | 第24-25页 |
| 3.2 Sox2 | 第25-26页 |
| 3.3 c-Myc | 第26页 |
| 3.4 Klf4 | 第26页 |
| 3.5 Nanog | 第26-27页 |
| 3.6 Lin28 | 第27页 |
| 3.7 SV40 LT | 第27-28页 |
| 3.8 h TERT | 第28页 |
| 4. 提高诱导多能干细胞产生效率研究进展 | 第28-36页 |
| 4.1 化学方法 | 第29-32页 |
| 4.2 物理方法 | 第32-33页 |
| 4.3 起始细胞 | 第33页 |
| 4.4 重编程因子 | 第33-35页 |
| 4.5 转导方法 | 第35-36页 |
| 5. 诱导多能干细胞机制 | 第36-42页 |
| 5.1 转录组层面 | 第37-38页 |
| 5.2 基因组层面 | 第38页 |
| 5.3 蛋白质组学层面 | 第38-39页 |
| 5.4 单细胞层面 | 第39-41页 |
| 5.6 多能性因子与谱系特异性分子之间的平衡 | 第41-42页 |
| 6. 小结 | 第42-43页 |
| 综述二 大动物诱导多能干细胞研究进展 | 第43-50页 |
| 1 猪iPSC研究进展 | 第43-44页 |
| 2 马iPSC研究进展 | 第44-45页 |
| 3 牛iPSC研究进展 | 第45页 |
| 4 绵羊和山羊iPSC研究进展 | 第45-47页 |
| 4.1 绵羊iPSC研究现状 | 第46-47页 |
| 4.2 山羊iPSC研究现状 | 第47页 |
| 5 狗iPSC研究进展 | 第47-48页 |
| 6 展望 | 第48-50页 |
| 第二部分 实验研究 | 第50-113页 |
| 实验一 绵羊体细胞的分离和饲养层细胞的制备 | 第50-59页 |
| 1 材料与方法 | 第50-55页 |
| 1.1 材料 | 第50-51页 |
| 1.2 方法 | 第51-55页 |
| 2 结果 | 第55-58页 |
| 2.1 成功分离SEF | 第55页 |
| 2.2 成功分离SKC | 第55-56页 |
| 2.3 成功分离绵羊胎儿BMSC | 第56页 |
| 2.4 流式细胞仪鉴定绵羊胎儿BMSC | 第56页 |
| 2.5 SEF、BMSC和SKC细胞生长曲线绘制 | 第56-57页 |
| 2.6 成功制备饲养层细胞 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58页 |
| 3.1 原代绵羊胎儿体细胞分离和培养 | 第58页 |
| 3.2 饲养层细胞选择及制备 | 第58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 实验二 干扰p53慢病毒载体的构建与干扰效果的鉴定 | 第59-72页 |
| 1 材料与方法 | 第60-66页 |
| 1.1 材料 | 第60页 |
| 1.2 方法 | 第60-66页 |
| 2 结果 | 第66-70页 |
| 2.1 成功构建靶向p53干扰片段的慢病毒载体 | 第66-67页 |
| 2.2 成功包装含有p53干扰片段的慢病毒 | 第67页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR筛选干扰效率高的干扰片段 | 第67-68页 |
| 2.4 Western blot检测不同干扰片段的干扰效率 | 第68-69页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR检测p21 m RNA相对水平 | 第69页 |
| 2.6 Western blot检测p53和p21蛋白表达水平 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-71页 |
| 3.1 p53的功能 | 第70页 |
| 3.2 p53抑制与体细胞重编程 | 第70-71页 |
| 4 小结 | 第71-72页 |
| 实验三ASF1A过表达慢病毒的构建与表达情况的鉴定 | 第72-87页 |
| 1 材料与方法 | 第73-81页 |
| 1.1 材料 | 第73页 |
| 1.2 方法 | 第73-81页 |
| 2 结果 | 第81-85页 |
| 2.1 成功构建EGFP蛋白表达的慢病毒载体p LEX-EGFP | 第81-82页 |
| 2.2 成功构建ASF1A蛋白表达的慢病毒载体p LEX-EGFP-ASF1A | 第82-83页 |
| 2.3 成功包装慢病毒EGFP-LV和ASF1A-LV | 第83页 |
| 2.4 慢病毒EGFP-LV和ASF1A-LV成功感染SKC细胞 | 第83-84页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR检测ASF1A m RNA水平 | 第84-85页 |
| 2.6 Western blot检测ASF1A蛋白表达水平 | 第85页 |
| 3 讨论 | 第85-86页 |
| 3.1 ASF1在体细胞重编程中的作用 | 第85-86页 |
| 3.2 ASF1A在重编程过程中发挥作用的机制 | 第86页 |
| 4 小结 | 第86-87页 |
| 实验四 绵羊诱导多能干细胞的制备及鉴定 | 第87-113页 |
| 1 材料与方法 | 第88-100页 |
| 1.1 材料 | 第88-89页 |
| 1.2 方法 | 第89-100页 |
| 2 结果 | 第100-109页 |
| 2.1 成功构建8种转录因子和四环素调控的反式作用因子rt TA的慢病毒 | 第100页 |
| 2.2 慢病毒成功感染绵羊体细胞 | 第100-101页 |
| 2.3 绵羊体细胞诱导成绵羊多能干细胞si PSC | 第101-102页 |
| 2.4 碱性磷酸酯酶染色 | 第102-104页 |
| 2.5 荧光定量PCR检测si PSC细胞中胚胎干细胞多能性因子的表达情况 | 第104-105页 |
| 2.6 荧光定量PCR分析外源基因表达情况 | 第105-106页 |
| 2.7 免疫荧光技术检测si PSC细胞中胚胎干细胞多能性因子蛋白表达情况 | 第106页 |
| 2.8 BSP技术检测si PSC细胞Nanog特异启动子区域甲基化程度 | 第106-107页 |
| 2.9 si PSC细胞核型分析 | 第107页 |
| 2.10 PCR检测拟胚体中三胚层特异性标记物表达情况 | 第107-108页 |
| 2.11 免疫荧光技术检测三胚层特异性标记物表达情况 | 第108-109页 |
| 2.12 畸胎瘤实验分析si PSC体内分化的多能性 | 第109页 |
| 3 讨论 | 第109-112页 |
| 3.1 不同体细胞对重编程效率的影响 | 第109-110页 |
| 3.2 p53敲低和ASF1A过表达对重编程效率的影响 | 第110页 |
| 3.3 慢病毒载体对重编程的影响 | 第110页 |
| 3.4 培养条件及方法对重编程效率的影响 | 第110-112页 |
| 4 小结 | 第112-113页 |
| 全文总结 | 第113-114页 |
| 本研究创新点 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-127页 |
| 附录 | 第127-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 作者简介 | 第131-132页 |
| 导师评阅表 | 第132页 |
