| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| ·植物GSTs的分类 | 第9页 |
| ·GSTs的结构 | 第9-11页 |
| ·GSTs二聚体界面的相互作用 | 第11页 |
| ·GSTs的催化机制 | 第11-12页 |
| ·植物GSTs的表达 | 第12-13页 |
| ·植物GSTs的功能 | 第13-19页 |
| ·植物GSTs的解毒作用 | 第13-15页 |
| ·植物GSTs发挥过氧化物酶抵御氧化胁迫 | 第15-16页 |
| ·植物GSTs作为分子伴侣发挥作用 | 第16-17页 |
| ·植物GSTs发挥异构酶的作用 | 第17页 |
| ·植物GSTs影响种子发育 | 第17页 |
| ·单体植物GSTs的功能 | 第17-19页 |
| ·定点突变方法的应用 | 第19页 |
| ·植物GSTs的研究进展和展望 | 第19-20页 |
| ·研究目的 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-33页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·构建TaGSTU4的定点突变体 | 第21-26页 |
| ·保守位点的选择 | 第21页 |
| ·突变引物的设计 | 第21-22页 |
| ·PCR反应 | 第22页 |
| ·PCR产物的连接转化 | 第22-24页 |
| ·PCR产物的连接 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23-24页 |
| ·TaGSTU4野生型和突变体表达载体的构建 | 第24-26页 |
| ·质粒提取 | 第24页 |
| ·质粒双酶切 | 第24页 |
| ·鼎国公司胶纯化回收试剂盒纯化 | 第24-25页 |
| ·构建表达载体 | 第25-26页 |
| ·采用CaCl2法制备大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞 | 第26页 |
| ·表达和分离纯化 | 第26-27页 |
| ·IPTG诱导过量表达 | 第26页 |
| ·分离纯化 | 第26-27页 |
| ·分子量鉴定 | 第27-29页 |
| ·单体分子量和纯化结果鉴定 | 第27-28页 |
| ·十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第27页 |
| ·基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱测量法(MALDI-TOF MS) | 第27-28页 |
| ·二聚体分子量的鉴定 | 第28-29页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE) | 第28页 |
| ·凝胶过滤(gel filtration) | 第28-29页 |
| ·酶学活性测定 | 第29-30页 |
| ·底物活性测序 | 第29-30页 |
| ·酶促动力学分析 | 第30页 |
| ·结构变化研究 | 第30-33页 |
| ·热力学稳定性测定 | 第30页 |
| ·圆二色谱 | 第30-31页 |
| ·荧光色谱 | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-47页 |
| ·载体构建 | 第33-38页 |
| ·氨基酸多重序列比对,保守位点的选择 | 第33-36页 |
| ·TaGSTU4野生型和突变体序列的克隆 | 第36-38页 |
| ·质粒双酶切 | 第38页 |
| ·表达和分离纯化 | 第38-42页 |
| ·融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中表达 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白可溶性表达鉴定 | 第39页 |
| ·融合蛋白分离纯化 | 第39-41页 |
| ·融合蛋白二聚体鉴定 | 第41-42页 |
| ·酶学活性测定 | 第42-43页 |
| ·底物活性测定 | 第42页 |
| ·酶促动力学结果 | 第42-43页 |
| ·结构研究 | 第43-47页 |
| ·热力学稳定性的结果 | 第43-44页 |
| ·圆二色谱结果 | 第44页 |
| ·荧光色谱结果 | 第44-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 5 总结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 个人简介 | 第57-59页 |
| 导师简介 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 缩略语表 | 第63页 |
