| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第14-15页 |
| 1.2 木质素及其合成途径 | 第15-20页 |
| 1.2.1 木质素概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 竹木质素 | 第16页 |
| 1.2.3 木质素生物合成中的几种重要酶 | 第16-17页 |
| 1.2.4 木质素生物合成途径 | 第17-20页 |
| 1.3 木质素生物合成的基因调控 | 第20页 |
| 1.3.1 木质素生物合成基因调控策略 | 第20页 |
| 1.3.2 木质素生物合成基因调控研究现状 | 第20页 |
| 1.4 木质素含量调控 | 第20-22页 |
| 1.4.1 肉桂酸-4-羟化酶 | 第20-21页 |
| 1.4.2 肉桂酸-3-羟化酶和对羟基-肉桂酰辅酶 A 莽草酸/荃宁酸酯转移酶 | 第21-22页 |
| 1.4.3 肉桂酰辅酶 A 还原酶 | 第22页 |
| 1.5 CDNA 末端的快速克隆技术（RACE 技术） | 第22-23页 |
| 1.6 RNA 干扰(RNAI)技术 | 第23页 |
| 1.7 研究主要内容及技术路线 | 第23-24页 |
| 1.7.1 研究主要内容 | 第23-24页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第24页 |
| 2 慈竹 C4H 基因保守区的克隆 | 第24-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 材料 | 第24页 |
| 2.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第24-25页 |
| 2.1.3 试验用其他主要试剂的配置 | 第25-26页 |
| 2.1.4 试验用主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 慈竹嫩茎总 RNA 的提取 | 第27页 |
| 2.2.2 慈竹嫩茎 cDNA 的合成 | 第27-28页 |
| 2.2.3 慈竹 C4H 基因保守区的 PCR 扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.4 慈竹 C4H 基因保守区的克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.5 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.2.6 转化 | 第30-31页 |
| 2.2.7 阳性克隆的筛选 | 第31页 |
| 2.2.8 序列测定 | 第31-32页 |
| 2.3 结果分析 | 第32-34页 |
| 2.3.1 RNA 提取结果 | 第32页 |
| 2.3.2 慈竹 C4H 保守区克隆 | 第32页 |
| 2.3.3 慈竹 C4H 保守区 PCR 产物克隆的酶切验证 | 第32-33页 |
| 2.3.4 慈竹 C4H 保守区的生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 2.4 结论 | 第34页 |
| 3 慈竹 C4H 基因的 5ˊ端克隆 | 第34-41页 |
| 3.1 试验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第34页 |
| 3.1.3 试验用其他主要试剂的配置 | 第34页 |
| 3.1.4 试验用主要仪器 | 第34-35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-39页 |
| 3.2.1 慈竹嫩茎总 RNA 的提取 | 第35页 |
| 3.2.2 慈竹嫩茎 5ˊRACE 特异 cDNA 的合成 | 第35页 |
| 3.2.3 慈竹 C4H 基因的 5ˊRACE PCR 扩增 | 第35-37页 |
| 3.2.4 慈竹 C4H 基因的 5ˊRACE PCR 产物的克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.5 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 3.2.6 转化 | 第38页 |
| 3.2.7 阳性克隆的筛选 | 第38-39页 |
| 3.2.8 序列测定 | 第39页 |
| 3.3 结果分析 | 第39-41页 |
| 3.3.1 慈竹 C4H 基因的 5ˊRACE PCR 扩增 | 第39页 |
| 3.3.2 慈竹 C4H 基因的 5ˊRACE PCR 产物克隆的酶切验证 | 第39页 |
| 3.3.3 慈竹 C4H 基因的 5ˊ端基因的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 3.4 结论 | 第41页 |
| 4 慈竹 C4H 基因的 3ˊ端克隆 | 第41-47页 |
| 4.1 试验材料 | 第41页 |
| 4.1.1 材料 | 第41页 |
| 4.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第41页 |
| 4.1.3 试验用其他试剂的配置 | 第41页 |
| 4.1.4 试验用主要仪器 | 第41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-45页 |
| 4.2.1 慈竹总 RNA 的提取 | 第41页 |
| 4.2.2 慈竹 cDNA 的合成 | 第41页 |
| 4.2.3 慈竹 C4H 基因的 3ˊRACE PCR 扩增 | 第41-43页 |
| 4.2.4 慈竹 C4H 的 3ˊRACE PCR 产物的克隆 | 第43-44页 |
| 4.2.5 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第44页 |
| 4.2.6 转化 | 第44页 |
| 4.2.7 阳性克隆的筛选 | 第44-45页 |
| 4.2.8 序列测定 | 第45页 |
| 4.3 结果分析 | 第45-47页 |
| 4.3.1 慈竹 C4H 基因的 3ˊRACE PCR 扩增 | 第45页 |
| 4.3.2 慈竹 C4H 基因的 3ˊRACE PCR 产物克隆的酶切验证 | 第45-46页 |
| 4.3.3 慈竹 C4H 基因的 3ˊ端基因的生物信息学分析 | 第46-47页 |
| 4.4 结论 | 第47页 |
| 5 慈竹 C4H 基因全长序列的获得 | 第47-60页 |
| 5.1 试验材料 | 第47页 |
| 5.1.1 材料 | 第47页 |
| 5.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第47页 |
| 5.1.3 试验用其他主要试剂的配置 | 第47页 |
| 5.1.4 试验用主要仪器 | 第47页 |
| 5.2 试验方法 | 第47-50页 |
| 5.2.1 慈竹嫩茎总 RNA 的提取 | 第47页 |
| 5.2.2 慈竹嫩茎 cDNA 的合成 | 第47-48页 |
| 5.2.3 慈竹 C4H 基因全长的 PCR 扩增 | 第48-49页 |
| 5.2.4 慈竹 C4H 基因全长的克隆 | 第49页 |
| 5.2.5 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第49页 |
| 5.2.6 转化 | 第49页 |
| 5.2.7 阳性克隆的筛选 | 第49-50页 |
| 5.2.8 序列测定 | 第50页 |
| 5.3 结果分析 | 第50-52页 |
| 5.3.1 慈竹 C4H 基因全长的 PCR 扩增 | 第50页 |
| 5.3.2 慈竹 C4H 基因全长的 PCR 产物克隆的酶切验证 | 第50-51页 |
| 5.3.3 慈竹 C4H 基因全长序列的获得 | 第51-52页 |
| 5.4 慈竹 C4H 的生物信息学分析 | 第52-60页 |
| 5.4.1 试验数据 | 第52-53页 |
| 5.4.2 研究方法 | 第53页 |
| 5.4.3 结果与分析 | 第53-60页 |
| 5.5 结论 | 第60页 |
| 6 慈竹 C3H 基因全长序列的获得 | 第60-73页 |
| 6.1 试验材料 | 第60页 |
| 6.1.1 材料 | 第60页 |
| 6.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第60页 |
| 6.1.3 试验用其他主要试剂的配置 | 第60页 |
| 6.1.4 试验用主要仪器 | 第60页 |
| 6.2 试验方法 | 第60-63页 |
| 6.2.1 慈竹嫩茎总 RNA 的提取 | 第60-61页 |
| 6.2.2 慈竹嫩茎 cDNA 的合成 | 第61页 |
| 6.2.3 慈竹 C3H 基因全长的 PCR 扩增 | 第61-62页 |
| 6.2.4 慈竹 C3H 基因全长的克隆 | 第62页 |
| 6.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第62页 |
| 6.2.6 转化 | 第62页 |
| 6.2.7 阳性克隆的筛选 | 第62-63页 |
| 6.2.8 序列测定 | 第63页 |
| 6.3 结果分析 | 第63-65页 |
| 6.3.1 慈竹 C3H 基因全长的 PCR 扩增 | 第63页 |
| 6.3.2 慈竹 C3H 基因全长 PCR 产物克隆的酶切验证 | 第63-64页 |
| 6.3.3 慈竹 C3H 基因全长序列的获得 | 第64-65页 |
| 6.4 慈竹 C3H 的生物信息学分析 | 第65-73页 |
| 6.4.1 试验数据 | 第65页 |
| 6.4.2 研究方法 | 第65-66页 |
| 6.4.3 结果分析 | 第66-73页 |
| 6.4.4 结论 | 第73页 |
| 7 慈竹 C3H RNAI 表达载体的构建 | 第73-83页 |
| 7.1 试验材料 | 第73-74页 |
| 7.1.1 材料 | 第73页 |
| 7.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第73页 |
| 7.1.3 试验用其他主要试剂的配置 | 第73-74页 |
| 7.1.4 试验用主要仪器 | 第74页 |
| 7.2 试验方法 | 第74-79页 |
| 7.2.1 慈竹嫩茎总 RNA 的提取 | 第74页 |
| 7.2.2 慈竹嫩茎 cDNA 的合成 | 第74-75页 |
| 7.2.3 慈竹 C3H RNAi 目标片段的扩增 | 第75页 |
| 7.2.4 慈竹 C3H RNAi 目标片段的克隆与测序 | 第75-77页 |
| 7.2.5 中间表达载体 pSK-C3H-RNAi 的构建 | 第77-79页 |
| 7.2.6 pBI-C3H-RNAi 质粒转化农杆菌 EHA10566 | 第79页 |
| 7.3 结果分析 | 第79-83页 |
| 7.3.1 慈竹 C3H RNAi 目标片段的扩增 | 第79-80页 |
| 7.3.2 慈竹 C3H RNAi 目标片段的克隆 | 第80页 |
| 7.3.3 慈竹 C3H RNAi 目标片段的序列分析 | 第80-81页 |
| 7.3.4 中间表达载体 pSK-C3H-RNAi 的构建与鉴定 | 第81页 |
| 7.3.5 植物表达载体 pBI-C3H-RNAi 的构建与鉴定 | 第81-82页 |
| 7.3.6 pBI-C3H-RNAi 质粒转化农杆菌 | 第82-83页 |
| 7.4 结论 | 第83页 |
| 8 慈竹 CCR 基因保守区的克隆 | 第83-88页 |
| 8.1 试验材料 | 第83-84页 |
| 8.1.1 材料 | 第83页 |
| 8.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第83页 |
| 8.1.3 试验用其他主要试剂的配置 | 第83页 |
| 8.1.4 试验用主要仪器 | 第83-84页 |
| 8.2 试验方法 | 第84-86页 |
| 8.2.1 慈竹嫩茎总 RNA 的提取 | 第84页 |
| 8.2.2 慈竹嫩茎 cDNA 的合成 | 第84页 |
| 8.2.3 慈竹 CCR 基因保守区的 PCR 扩增 | 第84-85页 |
| 8.2.4 慈竹 CCR 基因保守区的克隆 | 第85页 |
| 8.2.5 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第85页 |
| 8.2.6 转化 | 第85页 |
| 8.2.7 阳性克隆的筛选 | 第85-86页 |
| 8.2.8 序列测定 | 第86页 |
| 8.3 结果分析 | 第86-87页 |
| 8.3.1 慈竹 CCR 保守区克隆 | 第86页 |
| 8.3.2 酶切验证 | 第86-87页 |
| 8.3.3 慈竹 CCR 保守区的生物信息学分析 | 第87页 |
| 8.4 结论 | 第87-88页 |
| 9 慈竹 CCR 基因的 5ˊ端克隆 | 第88-94页 |
| 9.1 试验材料 | 第88页 |
| 9.1.1 材料 | 第88页 |
| 9.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第88页 |
| 9.1.3 试验用其他主要试剂的配置 | 第88页 |
| 9.1.4 试验用主要仪器 | 第88页 |
| 9.2 试验方法 | 第88-92页 |
| 9.2.1 慈竹嫩茎总 RNA 的提取 | 第88页 |
| 9.2.2 慈竹嫩茎 5ˊRACE 特异 cDNA 的合成 | 第88页 |
| 9.2.3 慈竹 CCR 基因的 5ˊRACE PCR 扩增 | 第88-90页 |
| 9.2.4 慈竹 CCR 基因的 5ˊ端基因的扩增 | 第90-91页 |
| 9.2.5 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第91页 |
| 9.2.6 转化 | 第91页 |
| 9.2.7 阳性克隆的筛选 | 第91-92页 |
| 9.2.8 序列测定 | 第92页 |
| 9.3 结果分析 | 第92-93页 |
| 9.3.1 慈竹 CCR 基因的 5ˊRACE PCR 扩增 | 第92页 |
| 9.3.2 慈竹 CCR 基因的 5ˊRACE PCR 产物的克隆 | 第92-93页 |
| 9.3.3 慈竹 CCR 基因的 5ˊRACE PCR 产物的生物信息学分析 | 第93页 |
| 9.4 结论 | 第93-94页 |
| 10 慈竹 CCR 基因全长序列的获得 | 第94-99页 |
| 10.1 试验材料 | 第94页 |
| 10.1.1 材料 | 第94页 |
| 10.1.2 试验用主要试剂、菌种 | 第94页 |
| 10.1.3 试验用其他主要试剂的配置 | 第94页 |
| 10.1.4 试验用主要仪器 | 第94页 |
| 10.2 试验方法 | 第94-97页 |
| 10.2.1 慈竹嫩茎总 RNA 的提取 | 第94页 |
| 10.2.2 慈竹嫩茎 cDNA 的合成 | 第94页 |
| 10.2.3 慈竹 CCR 基因全长的 PCR 扩增 | 第94-95页 |
| 10.2.4 慈竹 CCR 基因全长的克隆 | 第95-96页 |
| 10.2.5 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第96页 |
| 10.2.6 转化 | 第96页 |
| 10.2.7 阳性克隆的筛选 | 第96-97页 |
| 10.2.8 序列测定 | 第97页 |
| 10.3 结果分析 | 第97-99页 |
| 10.3.1 慈竹 CCR 全长基因的克隆 | 第97页 |
| 10.3.2 慈竹 CCR 基因全长 PCR 产物克隆的酶切验证 | 第97-98页 |
| 10.3.3 慈竹 CCR 基因全长序列的生物信息学分析 | 第98-99页 |
| 10.4 结论 | 第99页 |
| 11 慈竹 C4H 和 C3H 基因的组织表达分析 | 第99-102页 |
| 11.1 试验材料 | 第99页 |
| 11.1.1 材料 | 第99页 |
| 11.1.2 试验用主要试剂 | 第99页 |
| 11.2 试验方法 | 第99-102页 |
| 11.2.1 慈竹 NaC3H、NaC4H 和 Tublin 基因半定量 RT-PCR 引物 | 第99-100页 |
| 11.2.2 慈竹总 RNA 的提取 | 第100-101页 |
| 11.2.3 慈竹 cDNA 的合成 | 第101页 |
| 11.2.4 慈竹 NaC3H、NaC4H 和 Tublin 基因半定量 RT-PCR 反应体系 | 第101页 |
| 11.2.5 慈竹 NaC3H、NaC4H 和 Tublin 基因半定量 RT-PCR 反应程序 | 第101页 |
| 11.2.6 慈竹 NaC3H、NaC4H 和 Tublin 基因半定量 RT-PCR 电泳检测 | 第101-102页 |
| 11.3 结果分析 | 第102页 |
| 11.4 结论 | 第102页 |
| 12 讨论 | 第102-105页 |
| 结论 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-113页 |
| 附录 | 第113-116页 |
| 攻读学位期间发表的与学位论文内容相关的学术论文及研究成果 | 第116页 |
