| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| ·甘蔗蔗糖代谢及其相关酶 | 第9-10页 |
| ·蔗糖代谢 | 第9页 |
| ·甘蔗中与蔗糖代谢相关的酶及其功能 | 第9-10页 |
| (1) 蔗糖合成酶(SS) | 第9-10页 |
| (2) 转化酶(Inv) | 第10页 |
| ·蔗糖磷酸合酶(SPS)的研究进展 | 第10-12页 |
| ·SPS的发现、结构及分布 | 第10页 |
| ·SPS的生物学特性 | 第10页 |
| ·SPS基因的克隆 | 第10-11页 |
| ·SPS的生物学功能 | 第11-12页 |
| ·SPS对光合作用产物分配积累的影响 | 第11页 |
| ·SPS对作物生长发育的影响 | 第11页 |
| ·SPS对作物产量和品质特性的影响 | 第11-12页 |
| ·SPS基因的表达与调控 | 第12页 |
| ·蔗糖磷酸合酶基因转基因植株的遗传转化表现 | 第12页 |
| ·实时荧光定量PCR技术研究进展 | 第12-15页 |
| ·在操作过程中需要注意三个理论问题 | 第13页 |
| ·实时荧光定量PCR的分类 | 第13页 |
| ·实时荧光定量PCR的定量方法 | 第13-14页 |
| ·影响实时荧光定量PCR试验结果的因素 | 第14页 |
| ·实时荧光定量PCR在甘蔗上的应用研究进展 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| ·本研究技术路线 | 第16-17页 |
| 第二章 甘蔗蔗糖磷酸合成酶SPSⅢ cDNA片段扩增与鉴定 | 第17-25页 |
| ·材料与方法 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·所用菌种及试剂 | 第17-18页 |
| ·溶液、缓冲液与试剂配制 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·皿器的准备 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-23页 |
| ·甘蔗各个部位总RNA提取及其纯化 | 第18-19页 |
| ·总RNA浓度及其纯度检测 | 第19页 |
| ·甘蔗cDNA第一链的合成 | 第19-20页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·甘蔗蔗糖磷酸合酶SPSⅢ与内参因目标片段扩增 | 第20-22页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第20页 |
| ·目的片段的回收 | 第20-21页 |
| ·目的DNA片段与载体的链接 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞(JM109)的制配 | 第21页 |
| ·链接转化 | 第21-22页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取及纯化 | 第22页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第22页 |
| ·重组质粒序列测定及分析 | 第22-23页 |
| ·结果分析 | 第23-24页 |
| ·甘蔗各个部位总RNA提取及其cDNA第一链的合成 | 第23页 |
| ·内参基因与甘蔗SPS基因cDNA片段扩增及测序鉴定 | 第23-24页 |
| ·讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 甘蔗蔗糖磷酸合酶SPSⅢ基因表达的半定量PT-PCR分析 | 第25-31页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·植物材料种植及采样 | 第25页 |
| ·主要试剂配制 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-26页 |
| ·甘蔗各个部位总RNA提取及纯化 | 第25页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·半定量RT-PCR分析目的基因的表达 | 第25-26页 |
| ·半定量RT-PCR反应体系 | 第25页 |
| ·甘蔗SPSⅢ表达特性分析 | 第25-26页 |
| ·结果分析 | 第26-28页 |
| ·甘蔗工艺成熟初期SPSⅢ基因表达分析 | 第26-27页 |
| ·甘蔗工艺成熟中期SPSⅢ基因表达分析 | 第27页 |
| ·甘蔗工艺成熟后期SPSⅢ基因表达分析 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-31页 |
| ·半定量PCR的可行性 | 第28页 |
| ·循环次数的确定 | 第28-29页 |
| ·内参基因的确定 | 第29页 |
| ·甘蔗工艺成熟期SPSⅢ基因表达分析 | 第29-31页 |
| 第四章 甘蔗蔗糖磷酸合酶SPS Ⅲ基因表达的实时定量PCR分析 | 第31-36页 |
| ·实验材料与方法 | 第31页 |
| ·植物材料种植与采样 | 第31页 |
| ·主要试剂配制 | 第31页 |
| ·试验方法 | 第31-32页 |
| ·甘蔗总RNA提取 | 第31页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第31页 |
| ·引物的设计 | 第31页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第31-32页 |
| ·实验样本 | 第31页 |
| ·实时定量PCR试验材料及仪器 | 第31页 |
| ·定量标准品的制备 | 第31-32页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第32页 |
| ·数据分析 | 第32页 |
| ·结果分析 | 第32-35页 |
| ·real-time PCR反应与定量PCR产物特异性分析 | 第33页 |
| ·甘蔗工艺成熟初期SPSⅢ基因表达分析 | 第33-34页 |
| ·甘蔗工艺成熟中期SPSⅢ基因表达分析 | 第34页 |
| ·甘蔗工艺成熟后期SPSⅢ基因表达分析 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第五章 结论与研究展望 | 第36-38页 |
| ·结论 | 第36-37页 |
| (1) RNA质量分析 | 第36页 |
| (2) 序列分析 | 第36页 |
| (3) 半定量RT-PCR分析 | 第36页 |
| (4) 溶解曲线 | 第36页 |
| (5) 实时荧光定量PCR分析 | 第36-37页 |
| ·研究展望 | 第37页 |
| ·后续工作研究 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 攻读硕士期间发表的与学位论文有关的论文目录 | 第47-48页 |
