| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 引言 | 第16-17页 |
| 1.2 基因突变检测技术简介 | 第17-19页 |
| 1.2.1 测序型 | 第17-18页 |
| 1.2.2 非测序型 | 第18-19页 |
| 1.3 单碱基突变检测方法概述 | 第19-23页 |
| 1.3.1 焦磷酸测序法(Pyrosequencing) | 第19-21页 |
| 1.3.2 等位基因特异性扩增法(AS-PCR) | 第21页 |
| 1.3.3 基因芯片法(Gene chip) | 第21-22页 |
| 1.3.4 电化学传感器法(Electrochemical sensor) | 第22-23页 |
| 1.3.5 夹心实验法(Sandwich assay) | 第23页 |
| 1.4 等温扩增反应(Isothermal amplification) | 第23-25页 |
| 1.4.1 滚环扩增反应(RCA) | 第23-24页 |
| 1.4.2 重组聚合酶扩增反应(RPA) | 第24页 |
| 1.4.3 等温指数扩增反应(IEXPAR) | 第24-25页 |
| 1.5 核酸短暂杂交 | 第25-26页 |
| 1.6 课题研究内容以及选题意义 | 第26-30页 |
| 1.6.1 主要研究内容 | 第26-28页 |
| 1.6.2 研究成果及创新点 | 第28-30页 |
| 第二章 磁珠动态夹心法的构建 | 第30-46页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第30-32页 |
| 2.1.1 试剂与材料 | 第30页 |
| 2.1.2 实验仪器与设备 | 第30-31页 |
| 2.1.3 寡核苷酸序列 | 第31-32页 |
| 2.2 溶液的配制 | 第32页 |
| 2.2.1 缓冲液Ⅰ | 第32页 |
| 2.2.2 缓冲液Ⅱ | 第32页 |
| 2.2.3 缓冲液Ⅲ | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.3.1 生物素单链DNA包被链霉亲和素磁珠的制备 | 第32-33页 |
| 2.3.2 核酸短暂杂交 | 第33-34页 |
| 2.3.3 核酸稳定杂交 | 第34页 |
| 2.3.4 低丰度突变研究 | 第34-35页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第35-45页 |
| 2.4.1 生物素单链DNA包被链霉亲和素磁珠的制备结果 | 第35-36页 |
| 2.4.2 核酸短暂杂交 | 第36-43页 |
| 2.4.3 核酸短暂杂交与核酸稳定杂交的比较 | 第43-44页 |
| 2.4.4 低丰度突变研究 | 第44-45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 磁珠表面负电荷对磁珠动态夹心法性能影响的分析 | 第46-54页 |
| 3.1 实验材料及仪器 | 第46-47页 |
| 3.1.1 试剂与材料 | 第46页 |
| 3.1.2 实验仪器与设备 | 第46-47页 |
| 3.1.3 寡核苷酸序列 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 不同浓度捕获探针与磁珠结合的磁珠夹心反应 | 第47-48页 |
| 3.2.2 不同目标链浓度与磁珠结合的磁珠夹心反应 | 第48页 |
| 3.2.3 不同粒径SA磁珠的磁珠夹心反应 | 第48-49页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第49-53页 |
| 3.3.1 不同浓度捕获探针对DSA性能影响的研究 | 第49-52页 |
| 3.3.2 不同目标链浓度对DSA性能影响的研究 | 第52页 |
| 3.3.3 不同粒径SA磁珠对DSA性能影响的研究 | 第52-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 磁珠动态夹心法检测单核苷酸突变的多模式下游分析 | 第54-66页 |
| 4.1 实验材料及仪器 | 第54-55页 |
| 4.1.1 试剂与材料 | 第54页 |
| 4.1.2 实验仪器与设备 | 第54-55页 |
| 4.1.3 寡核苷酸序列 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 G-四联体介导的氯化血红素模拟酶显色反应 | 第56页 |
| 4.2.2 等温指数扩增反应((IEXPAR) | 第56-58页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第58-64页 |
| 4.3.1 G-四联体介导的DNA模拟酶显色反应 | 第58-60页 |
| 4.3.2 等温指数扩增反应((IEXPAR) | 第60-62页 |
| 4.3.3 IEXPAR对DSA下游检测及检测限的确定 | 第62-64页 |
| 4.4 本章小结 | 第64-66页 |
| 第五章 癌细胞单核苷酸突变的检测 | 第66-76页 |
| 5.1 实验材料及仪器 | 第66-68页 |
| 5.1.1 试剂与材料 | 第66页 |
| 5.1.2 实验仪器与设备 | 第66-67页 |
| 5.1.3 寡核苷酸序列 | 第67-68页 |
| 5.2 人工合成BRAF D594G和BRAF V600E突变基因的DSA检测 | 第68页 |
| 5.3 细胞培养 | 第68-70页 |
| 5.3.1 细胞复苏 | 第69页 |
| 5.3.2 细胞换液 | 第69页 |
| 5.3.3 细胞传代 | 第69页 |
| 5.3.4 细胞冻存 | 第69-70页 |
| 5.4 A375及HEK-293细胞基因组DNA的提取 | 第70-71页 |
| 5.5 细胞提取BRAF D594G和BRAF V600E突变基因的DSA检测 | 第71-72页 |
| 5.6 实验结果与讨论 | 第72-74页 |
| 5.6.1 人工合成BRAF D594G和BRAF V600E突变基因的DSA检测 | 第72页 |
| 5.6.2 细胞基因组DNA提取结果 | 第72-73页 |
| 5.6.3 细胞基因组BRAF基因突变DSA检测 | 第73-74页 |
| 5.6.4 本文磁珠动态夹心法与现有的单核苷酸突变检测方法的比较 | 第74页 |
| 5.7 本章小结 | 第74-76页 |
| 第六章 总结与展望 | 第76-78页 |
| 6.1 主要结论 | 第76-77页 |
| 6.2 展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第84-86页 |
| 作者与导师简介 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87-88页 |
