| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6页 |
| 1 绪论 | 第11-24页 |
| 1．1 引言 | 第11页 |
| 1．2 基因工程药物生产的基本过程 | 第11-13页 |
| 1．3 本文的主要研究内容 | 第13-18页 |
| 1．3．1 国内外研究概况及开发突变型IL-2的必要性 | 第13-14页 |
| 1．3．2 人IL-2的结构及理化性质 | 第14-17页 |
| 1．3．3 IL-2R及其基因结构 | 第17-18页 |
| 1．3．4 IL-2生物学活性与IL-2R的相互关系 | 第18页 |
| 1．4 本文的创新之处 | 第18-24页 |
| 1．4．1 IL-2三突变位点的设计思想 | 第18-20页 |
| 1．4．2 用巴斯德毕赤酵母系统（Pichia Pastoris）表达IL-2和变异IL-2 | 第20-21页 |
| 1．4．3 建立一种简单方便、且有效的Pichia Pastoris的直接诱导表达方法 | 第21-22页 |
| 1．4．4 建立一套用Pichia Pastoris分泌表达的变异IL-2并利于工业化生产的纯化工艺 | 第22-24页 |
| 2 克隆、表达及其纯化 | 第24-33页 |
| 2．1 材料与方法 | 第24-33页 |
| 2．1．1 细胞株与质粒 | 第24页 |
| 2．1．2 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2．1．3 主要试剂 | 第25-27页 |
| 2．1．4 突变型白细胞介素-2工程菌发酵 | 第27-28页 |
| 2．1．4． ①工程菌摇瓶条件下的发酵 | 第28-29页 |
| 2．1．4． ②转化子的高密度发酵 | 第29-30页 |
| 2．1．5 突变型白细胞介素－2的纯化 | 第30页 |
| 2．1．6 突变型白细胞介素-2（IL-2）蛋白的抗原性检测 | 第30-31页 |
| 2．1．7 突变型白细胞介素-2生物活性的测定 | 第31-32页 |
| 2．1．7 白细胞介素-2蛋的ELISA（免疫酶标技术）检测 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-43页 |
| 3．1 工程菌摇瓶条件下的发酵 | 第33-37页 |
| 3．1．1 直接诱导法和转换培养基诱导法表达蛋白的结果 | 第33页 |
| 3．1．2 碳源对转化子生长的影响 | 第33-34页 |
| 3．1．3 温度对突变型IL-2表达的影响 | 第34-35页 |
| 3．1．5 摇瓶转速对突变型IL-2表达的影响 | 第35-36页 |
| 3．1．6 不同OD_(600)对突变型白细胞介素－2蛋白表达的影响 | 第36-37页 |
| 3．2 转化子的高密度发酵 | 第37-39页 |
| 3．3 突变型白细胞介素－2的纯化 | 第39-40页 |
| 3．4 突变型白细胞介素－2蛋白抗原性检测 | 第40页 |
| 3．5 MTT法活性测定的结果 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| 4．1 较直接诱导法和传统诱导法的比较 | 第43-44页 |
| 4．2 毕赤酵母分泌型发酵产物纯化和大肠杆菌包涵体产物的纯化的比较 | 第44-46页 |
| 4．3 野生型IL－2蛋白同突变IL－2蛋白的性质比较 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-50页 |
| 参考文献 | 第50-49页 |
| 致谢 | 第49-53页 |
| 附录：攻硕期间论文发表及参加科研项目情况 | 第53页 |
