| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 基因编辑技术 | 第9-13页 |
| 1.1.1 锌指核酸内切酶 | 第9-10页 |
| 1.1.2 转录激活样效应器核酸内切酶 | 第10页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas体系概述 | 第10-13页 |
| 1.2 间充质干细胞 | 第13-14页 |
| 1.2.1 间充质干细胞临床应用 | 第14页 |
| 1.3 研究的目的及意义 | 第14-15页 |
| 2 绵羊ROSA26基因同源打靶载体的构建及活性检测 | 第15-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 实验载体信息 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂及药品 | 第15页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第15-16页 |
| 2.1.4 实验仪器及设备 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 绵羊ROSA26基因Cas9/sgRNA表达载体的构建 | 第17-20页 |
| 2.2.2 绵羊ROSA26基因Cas9/sgRNA表达载体的活性检测 | 第20-23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-24页 |
| 2.3.1 Cas9/sgRNA表达载体的鉴定 | 第23页 |
| 2.3.2 Cas9/sgRNA表达载体的活性检测 | 第23-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-25页 |
| 2.5 本章小结 | 第25-26页 |
| 3 CRISPR/Cas9介导的绵羊脐带间充质干细胞同源打靶 | 第26-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 3.1.1 实验载体信息 | 第26页 |
| 3.1.2 溶液配制 | 第26页 |
| 3.1.3 实验仪器和设备 | 第26-27页 |
| 3.1.4 实验试剂和药品 | 第27-28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 3.2.1 绵羊ROSA26基因同源臂表达载体的构建 | 第28-33页 |
| 3.2.2 绵羊脐带间充质干细胞的培养 | 第33页 |
| 3.2.3 绵羊脐带间充质干细胞的Puro抗性筛选 | 第33页 |
| 3.2.4 绵羊脐带间充质干细胞的转染 | 第33-34页 |
| 3.2.5 转基因阳性细胞的筛选及培养 | 第34页 |
| 3.2.6 转基因细胞的同源重组检测 | 第34-35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-41页 |
| 3.3.1 绵羊ROSA26基因左、右同源臂克隆载体构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.2 绵羊ROSA26基因左、右同源臂表达载体的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.3 筛选转基因细胞的最佳嘌呤霉素浓度 | 第37-38页 |
| 3.3.4 转基因阳性细胞的筛选 | 第38-40页 |
| 3.3.5 转基因细胞的同源重组检测 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 本章小结 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录 | 第49-50页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
