| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 洋葱伯克霍尔德氏菌研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1 洋葱伯克霍尔德氏菌概述 | 第13页 |
| 1.2 Bcc的生防作用 | 第13-14页 |
| 1.3 Bcc研究展望 | 第14页 |
| 2 植物内生细菌研究进展 | 第14-20页 |
| 2.1 植物内生细菌的概念 | 第14-15页 |
| 2.2 植物内生细菌的分类及分离鉴定 | 第15-16页 |
| 2.2.1 传统的分离培养法 | 第15-16页 |
| 2.2.2 分子生物学方法 | 第16页 |
| 2.3 植物内生细菌的生物学功能及其作用机制 | 第16-17页 |
| 2.3.1 与病原菌竞争生态位和营养物质 | 第16页 |
| 2.3.2 产生抗菌活性物质 | 第16-17页 |
| 2.3.3 诱导系统抗性（ISR） | 第17页 |
| 2.4 内生细菌在植物病虫害生物防治中的应用 | 第17-19页 |
| 2.5 杨树内生细菌的研究进展 | 第19-20页 |
| 3 杨树溃疡病研究现状 | 第20-22页 |
| 3.1 杨树溃疡病的发生及危害 | 第20页 |
| 3.2 杨树溃疡病的种类 | 第20-21页 |
| 3.3 杨树溃疡病的防治现状 | 第21-22页 |
| 4 杨树虫害研究现状 | 第22-23页 |
| 4.1 杨树虫害的发生及危害 | 第22-23页 |
| 4.2 杨树虫害的防治现状 | 第23页 |
| 5 植物内生细菌工程菌及其生物安全性评价 | 第23-24页 |
| 5.1 植物内生细菌工程菌研究进展 | 第23-24页 |
| 5.2 工程菌的生物安全性评价的内容 | 第24页 |
| 6 本研究的立题背景和研究目的 | 第24-27页 |
| 6.1 立题背景 | 第24-25页 |
| 6.2 研究目的 | 第25-27页 |
| 第二章 B. pyrrocinia JK-SH007抗病、抗虫生防工程菌构建 | 第27-55页 |
| 1 材料与方法 | 第28-42页 |
| 1.1 供试质粒、菌株及培养条件 | 第28-29页 |
| 1.2 培养基 | 第29页 |
| 1.3 构建重组质粒 | 第29-35页 |
| 1.3.1 质粒pHKT2的提取 | 第30-31页 |
| 1.3.2 制备线性载体 | 第31页 |
| 1.3.3 制备插入片段 | 第31-34页 |
| 1.3.3.1 启动子部分序列的克隆与纯化 | 第31-32页 |
| 1.3.3.2 gfp基因的克隆与纯化 | 第32-33页 |
| 1.3.3.3 Chi113基因的克隆与纯化 | 第33页 |
| 1.3.3.4 cry218基因的克隆与纯化 | 第33页 |
| 1.3.3.5 vip3A基因的克隆与纯化 | 第33页 |
| 1.3.3.6 Bxchi基因的克隆与纯化 | 第33-34页 |
| 1.3.4 重组质粒的构建及验证 | 第34-35页 |
| 1.3.4.1 pHKT2-Chi113重组质粒的构建及验证 | 第34页 |
| 1.3.4.2 pHKT2-cry218重组质粒的构建及验证 | 第34-35页 |
| 1.3.4.3 pHKT2-vip3A重组质粒的构建及验证 | 第35页 |
| 1.3.4.4 pHKT2-Bxchi重组质粒的构建及验证 | 第35页 |
| 1.4 制备B. pyrrocinia JK-SH007感受态细胞 | 第35页 |
| 1.5 重组质粒转化B. pyrrocinia JK-SH007感受态细胞 | 第35页 |
| 1.6 阳性转化子的筛选与鉴定 | 第35-36页 |
| 1.7 外源基因在mRNA水平的表达 | 第36-38页 |
| 1.7.1 工程菌株的总RNA提取 | 第36页 |
| 1.7.2 反转录PCR | 第36-37页 |
| 1.7.3 实时荧光定量PCR（qPCR） | 第37-38页 |
| 1.8 外源基因在蛋白质水平的表达 | 第38-41页 |
| 1.8.1 蛋白粗提液的制备 | 第38页 |
| 1.8.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测蛋白表达 | 第38-40页 |
| 1.8.3 Western Blot（WB）检测蛋白表达 | 第40页 |
| 1.8.4 融合蛋白的质谱分析 | 第40-41页 |
| 1.9 重组质粒的遗传稳定性测定 | 第41-42页 |
| 1.10 工程菌株的生长特性 | 第42页 |
| 1.10.1 工程菌株的菌落及细胞形态观察 | 第42页 |
| 1.10.2 工程菌株的生长曲线绘制 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-52页 |
| 2.1 含外源抗病、杀虫基因的重组质粒的构建 | 第42-45页 |
| 2.2 重组质粒转化B. pyrrocinia JK-SH007感受态细胞及阳性克隆的筛选 | 第45-46页 |
| 2.2.1 JK-SH007转化子的荧光观察 | 第45页 |
| 2.2.2 JK-SH007转化子的PCR验证 | 第45-46页 |
| 2.3 外源基因在mRNA水平的表达 | 第46-47页 |
| 2.4 四株工程菌的WB分析 | 第47-49页 |
| 2.5 四株工程菌的遗传稳定性研究 | 第49-50页 |
| 2.6 工程菌株与野生菌株生长特性的比较分析 | 第50-52页 |
| 3 结论与讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 工程菌B. pyrrocinia JK-SH007E1对杨树溃疡病病原真菌的拮抗能力 | 第55-62页 |
| 1 材料与方法 | 第56-58页 |
| 1.1 供试菌株及培养条件 | 第56页 |
| 1.2 培养基 | 第56页 |
| 1.3 胶体几丁质的制备 | 第56页 |
| 1.4 JK-SH007和JK-SH007E1菌株的几丁质酶活及抑菌活性测定 | 第56-57页 |
| 1.4.1 标准曲线的绘制 | 第56页 |
| 1.4.2 几丁质粗酶液的制备 | 第56-57页 |
| 1.4.3 几丁质酶活的测定及比较分析 | 第57页 |
| 1.4.4 抑菌活性的测定及比较分析 | 第57页 |
| 1.5 JK-SH007和JK-SH007E1菌株对杨树溃疡病菌的平板对峙试验 | 第57页 |
| 1.6 对峙平板上杨树溃疡病菌菌丝形态的显微观察 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-60页 |
| 2.1 工程菌JK-SH007E1产几丁质酶能力及其产生的几丁质酶活性测定 | 第58页 |
| 2.2 工程菌JK-SH007E1对杨树溃疡病菌的抑制作用 | 第58-60页 |
| 2.3 JK-SH007及工程菌JK-SH007E1对杨树溃疡病菌菌丝形态的影响 | 第60页 |
| 3 结论与讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 工程菌B. pyrrocinia JK-SH007E1在杨树体内的定殖及促生性 | 第62-70页 |
| 1 材料与方法： | 第62-64页 |
| 1.1 供试细菌及培养条件 | 第62页 |
| 1.2 供试植株 | 第62-63页 |
| 1.3 培养基 | 第63页 |
| 1.4 杨树无菌苗的准备 | 第63页 |
| 1.5 杨树实生苗的准备 | 第63页 |
| 1.6 细菌接种剂的制备 | 第63页 |
| 1.7 杨树无菌苗和实生苗的接种与培养 | 第63页 |
| 1.8 工程菌株JK-SH007E1在杨树实生苗体内的定殖动态 | 第63-64页 |
| 1.9 荧光显微镜下观察工程菌株JK-SH007E1在杨树无菌苗体内的定殖 | 第64页 |
| 1.10 工程菌株JK-SH007E1对杨树实生苗的生长效应 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-67页 |
| 2.1 工程菌JK-SH007E1在杨树实生苗体内的定殖动态 | 第64-65页 |
| 2.2 工程菌JK-SH007E1在杨树无菌苗体内的定殖观察 | 第65-66页 |
| 2.3 工程菌JK-SH007E1对杨树实生苗的生长效应 | 第66-67页 |
| 3 结论与讨论 | 第67-70页 |
| 第五章 工程菌B. pyrrocinia JK-SH007E1在杨树根际产生的微生态效应 | 第70-93页 |
| 1 材料与方法 | 第71-76页 |
| 1.1 供试细菌及培养条件 | 第71页 |
| 1.2 供试植株 | 第71页 |
| 1.3 培养基 | 第71页 |
| 1.4 杨树实生苗的准备 | 第71页 |
| 1.5 细菌接种剂的制备 | 第71页 |
| 1.6 杨树实生苗的接种 | 第71页 |
| 1.7 杨树根际土壤酶活性的测定 | 第71-73页 |
| 1.7.1 土壤磷酸酶活性的测定 | 第71-72页 |
| 1.7.2 土壤转化酶活性的测定 | 第72-73页 |
| 1.7.3 土壤脱氢酶活性的测定 | 第73页 |
| 1.8 Biolog生态板对杨树根际微生物群落多样性的分析 | 第73-74页 |
| 1.916S rRNA高通量测序技术对杨树根际微生物多样性和种群结构分析 | 第74-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-91页 |
| 2.1 工程菌JK-SH007E1对杨树根际主要土壤酶活性的影响 | 第76-77页 |
| 2.2 Biolog生态板法研究工程菌JK-SH007E1对杨树根际微生物多样性的影响 | 第77-79页 |
| 2.2.1 工程菌JK-SH007E1对杨树根际微生物整体活性的影响 | 第77-78页 |
| 2.2.2 工程菌JK-SH007E1对杨树根际微生物功能多样性的影响 | 第78-79页 |
| 2.3 16S高通量测序技术分析工程菌JK-SH007E1对杨树根际微生物多样性和种群结构的影响 | 第79-91页 |
| 2.3.1 OTUs分析及物种注释 | 第79-86页 |
| 2.3.1.1 OTUs分析 | 第79-82页 |
| 2.3.1.2 物种相对丰度组成及聚类分析 | 第82-86页 |
| 2.3.2 杨树根际微生物组成的复杂度分析 | 第86-89页 |
| 2.3.2.1 稀释曲线的绘制 | 第86-87页 |
| 2.3.2.2 α-多样性分析 | 第87页 |
| 2.3.2.3 Rank abundance曲线分析 | 第87-89页 |
| 2.3.3 不同土壤样本间微生物组成的比较分析 | 第89-91页 |
| 2.3.3.1 β-多样性分析 | 第89-90页 |
| 2.3.3.2 土壤样本间的主坐标分析 | 第90-91页 |
| 3 结论与讨论 | 第91-93页 |
| 第六章 全文总结和展望 | 第93-98页 |
| 1 全文总结 | 第93-95页 |
| 1.1 B. pyrrocinia JK-SH007抗病、抗虫生防工程菌构建 | 第93-94页 |
| 1.2 工程菌B. pyrrocinia JK-SH007E1对杨树溃疡病病原真菌的拮抗能力 | 第94页 |
| 1.3 工程菌B. pyrrocinia JK-SH007E1在杨树体内的定殖及促生性 | 第94-95页 |
| 1.4 工程菌B. pyrrocinia JK-SH007E1在杨树根际产生的微生态效应 | 第95页 |
| 2 论文创新点 | 第95-96页 |
| 3 问题与展望 | 第96-98页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-113页 |
