| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 1 文献综述 | 第8-13页 |
| 1.1 SNIP1基因的研究现状 | 第8-11页 |
| 1.1.1 SNIP1的发现 | 第8页 |
| 1.1.2 SNIP1的结构 | 第8页 |
| 1.1.3 SNIP1及其相关联蛋白的功能 | 第8-11页 |
| 1.2 甲壳动物蜕皮的调节机制 | 第11-13页 |
| 1.2.1 X-器官窦腺复合体及Y-器官 | 第11页 |
| 1.2.2 蜕皮激素 | 第11-12页 |
| 1.2.3 蜕皮抑制激素 | 第12页 |
| 1.2.4 蜕皮激素响应基因 | 第12-13页 |
| 2 引言 | 第13-15页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第13页 |
| 2.2 研究内容 | 第13-14页 |
| 2.2.1 SNIP1基因序列的克隆 | 第13页 |
| 2.2.2 SNIP1基因的原核表达及多抗制备 | 第13页 |
| 2.2.3 SNIP1基因的表达分析 | 第13页 |
| 2.2.4 蜕皮激素对SNIP1表达的影响 | 第13页 |
| 2.2.5 SNIP1基因干扰对蜕皮激素响应基因表达的调节作用 | 第13-14页 |
| 2.3 技术路线 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-28页 |
| 3.1 实验材料 | 第15页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第15-18页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第15页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第15-16页 |
| 3.2.3 常用溶液的配制 | 第16-18页 |
| 3.3 实验方法 | 第18-28页 |
| 3.3.1 SNIP1基因的克隆 | 第18-21页 |
| 3.3.2 | 第21-23页 |
| 3.3.3 重组蛋白检测及纯化 | 第23-24页 |
| 3.3.4 多克隆抗体制备 | 第24-25页 |
| 3.3.5 SNIP1的表达分析 | 第25-28页 |
| 4 结果与分析 | 第28-39页 |
| 4.1 总RNA的检测 | 第28页 |
| 4.2 SNIP1基因序列分析 | 第28-30页 |
| 4.3 SNIP1基因的ORF序列扩增 | 第30页 |
| 4.4 原核表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 4.4.1 目的片段的克隆鉴定 | 第30-31页 |
| 4.4.2 双酶切鉴定 | 第31页 |
| 4.4.3 菌落PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 4.5 重组SNIP1蛋白的表达及纯化 | 第32-33页 |
| 4.5.1 SDS-PAGE检测 | 第32-33页 |
| 4.5.2 重组蛋白纯化 | 第33页 |
| 4.5.3 Western blot分析 | 第33页 |
| 4.6 多克隆抗体制备 | 第33-34页 |
| 4.6.1 BCA法蛋白定量 | 第33-34页 |
| 4.7 SNIP1的表达分析 | 第34-39页 |
| 4.7.1 SNIP1基因的组织定量 | 第34-35页 |
| 4.7.2 注射蜕皮激素对SNIP1基因表达量影响 | 第35-36页 |
| 4.7.3 SNIP1 RNA干扰对蜕皮激素响应基因表达水平的影响 | 第36-39页 |
| 5 讨论 | 第39-40页 |
| 5.1 克氏原螯虾SNIP1序列分析 | 第39页 |
| 5.2 克氏原螯虾SNIP1的原核表达 | 第39页 |
| 5.3 荧光定量PCR和Western Blot | 第39-40页 |
| 6 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 个人简介 | 第47页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第47页 |
