| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-18页 |
| 1 骨肉瘤诊治进展 | 第12-18页 |
| 1.1 肿瘤特征的变化 | 第12-14页 |
| 1.2 骨肉瘤异质性 | 第14-15页 |
| 1.3 骨肉瘤治疗试验 | 第15页 |
| 1.4 联合化疗药物 | 第15页 |
| 1.5 免疫治疗 | 第15-16页 |
| 1.6 靶向治疗 | 第16页 |
| 1.7 双膦酸盐类药物 | 第16页 |
| 1.8 其他治疗方法 | 第16-17页 |
| 1.9 结语及展望 | 第17-18页 |
| 第一章 Leptin与SIRT1在骨肉瘤组织中的表达与临床病理特征相关性分析 | 第18-30页 |
| 1 材料与方法 | 第18-21页 |
| 1.1 材料 | 第18-19页 |
| 1.2 组织标本来源 | 第19-20页 |
| 1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 1.4 方法 | 第20-21页 |
| 1.5 统计学分析 | 第21页 |
| 2 结果 | 第21-28页 |
| 2.1 患者临床病理特征 | 第21页 |
| 2.2 Leptin与SIRT1的表达水平与临床病理特征的关系 | 第21-22页 |
| 2.3 Leptin与SIRT1高表达患者预后较差 | 第22-28页 |
| 3 讨论 | 第28-30页 |
| 第二章 Leptin对骨肉瘤细胞增殖凋亡及侵袭转移的影响 | 第30-46页 |
| 1 材料 | 第30-36页 |
| 1.1 细胞系 | 第30-31页 |
| 1.2 主要仪器耗材 | 第31-32页 |
| 1.3 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第33-36页 |
| 2 方法 | 第36-40页 |
| 2.1 细胞培养 | 第36页 |
| 2.2 Leptin处理实验 | 第36页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR | 第36-37页 |
| 2.4 应用SYBR GreenⅠ荧光染料技术 | 第37页 |
| 2.5 Western Blot方法 | 第37-38页 |
| 2.6 MTT细胞增殖实验 | 第38页 |
| 2.7 流式细胞仪检测 | 第38-39页 |
| 2.8 细胞粘附实验 | 第39页 |
| 2.9 Transwell细胞侵袭 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-44页 |
| 3.1 实时荧光定量PCR检测骨肉瘤细胞中VEGF的表达 | 第40页 |
| 3.2 Leptin处理对骨肉瘤细胞中VEGF蛋白水平的表达的影响 | 第40-41页 |
| 3.3 MTT实验检测Leptin处理后骨肉瘤细胞增殖 | 第41页 |
| 3.4 流式细胞仪检测处理后骨肉瘤细胞的周期及凋亡 | 第41-42页 |
| 3.5 Transwell实验检测处理后骨肉瘤粘附性及侵袭能力 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 SIRT1对骨肉瘤细胞增殖凋亡及侵袭转移的影响 | 第46-62页 |
| 1 材料 | 第47-52页 |
| 1.1 细胞系 | 第47页 |
| 1.2 主要仪器耗材 | 第47-48页 |
| 1.3 主要试剂 | 第48-49页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第49-52页 |
| 2 方法 | 第52-55页 |
| 2.1 细胞培养 | 第52页 |
| 2.2 细胞转染 | 第52页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR | 第52-53页 |
| 2.4 检测转染后三组细胞中VEGF的表达情况 | 第53页 |
| 2.5 Western Blot方法检测转染后的三组细胞中SIRT1与VEGF的表达情况 | 第53-55页 |
| 2.6 MTT细胞增殖实验检测转染后三组细胞增殖水平 | 第55页 |
| 2.7 流式细胞仪检测转染后三组骨肉瘤细胞的细胞周期和细胞凋亡率 | 第55页 |
| 2.8 细胞粘附实验检测各组骨肉瘤细胞的粘附能力 | 第55页 |
| 2.9 Transwell细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力 | 第55页 |
| 2.10 细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-60页 |
| 3.1 荧光显微镜下观察骨肉瘤细胞转染效率 | 第55-56页 |
| 3.2 实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤细胞中SIRT1的表达 | 第56-57页 |
| 3.3 转染SIRT1后三组骨肉瘤细胞中SIRT1与VEGF的表达变化情况 | 第57页 |
| 3.4 转染SIRT1后三组骨肉瘤细胞增殖水平 | 第57-58页 |
| 3.5 转染SIRT1后各组骨肉瘤细胞的细胞周期及凋亡率的变化 | 第58页 |
| 3.6 转染SIRT1后各组骨肉瘤细胞粘附性及侵袭能力变化 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 SIRT1介导瘦素促进骨肉瘤细胞侵袭转移的机制研究 | 第62-74页 |
| 1 材料 | 第62-67页 |
| 1.1 细胞系 | 第62-63页 |
| 1.2 主要仪器耗材 | 第63页 |
| 1.3 主要试剂 | 第63-64页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第64-67页 |
| 2 方法 | 第67-69页 |
| 2.1 细胞培养 | 第67页 |
| 2.2 重组腺病毒体外转染 | 第67页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR | 第67-68页 |
| 2.4 Leptin处理实验 | 第68页 |
| 2.5 检测Leptin处理后三组细胞中SIRT1的表达情况 | 第68页 |
| 2.6 Western Blot检测 | 第68页 |
| 2.7 酶联免疫吸附实验（ELISA） | 第68-69页 |
| 2.8 MTT细胞增殖实验 | 第69页 |
| 2.9 流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率 | 第69页 |
| 2.10 细胞粘附实验检测各组骨肉瘤细胞的粘附能力 | 第69页 |
| 2.11 Transwell细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力 | 第69页 |
| 2.12 细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-72页 |
| 3.1 Leptin对骨肉瘤细胞中SIRT1表达的影响 | 第69-70页 |
| 3.2 抑制SIRT1表达对Leptin促进骨肉瘤细胞侵袭转移的影响 | 第70页 |
| 3.3 抑制SIRT1表达对Leptin促进骨肉瘤细胞增殖的影响 | 第70-71页 |
| 3.4 SIRT1促进骨肉瘤细胞侵袭转移的机制 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第84页 |
